效應(yīng)物對中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影響.pdf

1、以中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)內(nèi)臟為材料，通過0.01mol·L<'-1>Tris-HC1緩沖液(pH 7.5含0.2mol·L<'-1>NaC1，5％乙醇)抽提處理，硫酸銨分級鹽析、DEAE-Cellulose(DEAE-32)離子交換柱、Sephadex G-100分子篩、第二次DEAE-32離子交換柱3次層析純化，獲得比活力為4490.79U/mg的電泳單一純N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase，E

2、C3.2.1.52)。該酶亞基分子量分別為121.21、98.63和73.48 kD，等電點為4.5。以對。硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)為底物，測得該酶在0.2mol·L<'-1>磷酸緩沖液(pH5.6)中催化水解pNP-NAG的最適pH為5.5，最適溫度為45℃；該酶在低于45℃，pH4.9-9.3范圍內(nèi)穩(wěn)定。在pH5.6的條件下，酶水解pNP-NAG的米氏常數(shù)K<,m>為0.357mmol·L<'-1>，

3、最大反應(yīng)速度V<.max>為10.409umol·L<'-1>·min<'-1>，反應(yīng)的活化能為76.50KJ/mol。 研究幾種有機溶劑對該酶活力的影響。結(jié)果表明：甲醇和乙醇對酶有先揚后抑作用，正丙醇、異丙醇、甲醛、丙酮、苯酚和二甲亞砜對酶的活性均有不同程度的抑制作用。甲醇、乙醇和異丙醇對酶的抑制類型都為可逆競爭性抑制類型，它們對酶的抑制常數(shù)K<,I>分別為3.66 mol·L<'-1>、0.36 mol·L<'-1>和0.

4、48mmol·L<'-1>。甲醛、苯酚和二甲亞砜對酶的抑制類型屬于可逆非競爭性抑制類型，它們對酶的抑制常數(shù)K<,1>分別為0.288 mol·L<'-1>、0.268mmol·L<'-1>和0.276 mol·L<'-1>。正丙醇、丙酮對酶的抑制類型為可逆混合型抑制類型，正丙醇對酶的抑制常數(shù)K<,1>與K<,IS>分別為3.14mmol·L<'-1>和9.35mmol·L<'-1>，丙酮對酶的抑制常數(shù)K<,I>與K<,IS>分別為0.1

5、95mmol·L<'-1>和0.620mmol·L<'-1>。戊二醛對酶活力沒有影響。 研究金屬離子對該酶的影響，結(jié)果表明：Na<'+>對酶有激活作用，Ba<'2+>、Ag<'2+>對酶活力有先揚后抑作用。Li<'+>和K<'+>對酶有微弱的抑制作用，Mg<'+2>、Cu<'2+>、Pb<'2+>、Zn<'2+>、Mn<'2+>和Al<'2+>對酶活力有不同程度的抑制作用。Mg<'2+>、Cu<'2+>和Zn<'2+>對酶的抑

6、制均表現(xiàn)為可逆非競爭性抑制類型，它們對酶的抑制常數(shù)K<,I>分別為0.704mol·L<'-1>、1．25mmol·L<'-1>和8.10mol·L<'-1>。Ag<'+>對酶的抑制作用為可逆反競爭性抑制類型，Ag<'+>對結(jié)合酶(ES)的抑制常數(shù)K<,I>為204.508mmol·L<'-1>。pb<'2+>對酶的抑制表現(xiàn)為可逆混合型抑制，pb<'2+>對酶的抑制常數(shù)K<,I>與K<,IS>分別為10.44mmol·L<'-1>和2.

7、217mol·L<'-1>。Ca<'2+>對酶活力沒有顯著影響。 研究12種氨基酸對該酶的影響。結(jié)果表明：在特定濃度范圍內(nèi)，L-Gly、L-Val、L-Thr、L-Ala、L-Phe和L-Ser等氨基酸對酶活力沒有顯著影響，而L-Gln、L-Met、L-Pro、L-Arg、L-His和L-Lvs對河蟹NAGase有不同程度的抑制作用。L-Pro對酶的抑制表現(xiàn)為可逆非競爭性類型，L-Pro對酶的抑制常數(shù)K<,I>為702.87m

8、mol·L<'-1>。L-Arg、L-His和L-Lvs對酶的抑制均表現(xiàn)為可逆反競爭性類型，它們對酶的抑制分別為1.682mmol·L<'-1>、85.81mmol·L<'-1>和1.517mmol·L<'-1>。水體中的富營養(yǎng)化產(chǎn)生的SO<,3><'2->對該酶活力有抑制作用，抑制類型為可逆反競爭性類型，SO<,3><'2->對酶的抑制常數(shù)K<,I>為253.995mmol·L<'-1>。NO<,2><'->在0-10mmol·L<'