南美白對(duì)蝦N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶的活力調(diào)控及動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-Acetyl-β-D-glucosaminidase，簡(jiǎn)稱NAGase，EC.3.2.1.52)在南美白對(duì)蝦(Penaeusvannamei)的蛻殼發(fā)育和營(yíng)養(yǎng)代謝中起重要作用，且具有多種應(yīng)用價(jià)值。 本文以南美白對(duì)蝦內(nèi)臟為提酶材料，獲得電泳單一純的NAGase酶制劑，本文以此酶制劑為對(duì)象展開(kāi)研究。 常見(jiàn)金屬離子Li+、Na+、K+對(duì)酶活力沒(méi)有影響，Co2+、Cd2+、Ba2+、Zn2+

2、、Al3+、Pb2+、Cu2+、Fe3+、Ag+、Hg2+，有不同程度的抑制。Ag+離子對(duì)酶表現(xiàn)為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制(KIS為2.39mmol/L)，Zn2+離子對(duì)酶表現(xiàn)為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制(KI為11.95mmol/L)，并研究了Zn2+離子對(duì)酶的抑制動(dòng)力學(xué)。 Hg2+離子對(duì)酶為不可逆抑制作用，IC50為0.16mmol/L。通過(guò)抑制動(dòng)力學(xué)研究，可求出微觀速率常數(shù)k+0和k+0。酶經(jīng)Hg2+離子作用后的熒光強(qiáng)度下降，酶在276nm處的紫外

3、特征吸收峰逐漸下降至幾乎消失。 丙酮在pH4.8～pH5.0范圍內(nèi)表現(xiàn)為抑制作用，pH5.2～pH8.0范圍內(nèi)為先激活后抑制，其中在pH6.2和pH6.8處達(dá)到激活的最大值。酶經(jīng)丙酮作用后的熒光發(fā)射強(qiáng)度迅速下降，熒光激發(fā)峰在強(qiáng)度下降的同時(shí)還伴隨著最大激發(fā)波長(zhǎng)的紅移(由280nm紅移到290nm)。 DMF和DMSO使酶失活的IC50分別為1.35mol/L和1.20mol/L。二者對(duì)酶的失活機(jī)理都為可逆，失活類型表現(xiàn)為混

4、合型類型。研究了DMF和DMSO對(duì)酶的失活作用動(dòng)力學(xué)，測(cè)定微觀速度常數(shù)。游離酶的失活速度常數(shù)明顯的大于ES結(jié)合酶的失活速度常數(shù)，說(shuō)明底物對(duì)酶的失活有保護(hù)作用。酶經(jīng)DMSO作用后的熒光強(qiáng)度隨著DMSO濃度增大逐漸上升，但未出現(xiàn)明顯紅移。 以熒光發(fā)射光譜研究酶經(jīng)不同濃度脲變性后的分子構(gòu)象變化。比較酶經(jīng)脲變性后的活力與構(gòu)象變化的關(guān)系，表明酶在脲溶液中的失活先于其去折疊的過(guò)程，這種活力喪失快于酶分子整體構(gòu)象變化的現(xiàn)象表明酶活性中心處于對(duì)