棉鈴蟲N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、、774939分類母：$47619密襲：福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文單位代碼：10389學(xué)號(hào)：2021503棉鈴蟲NE酰氨基葡萄糖苷酶的分離純化及性質(zhì)研究學(xué)科專業(yè)：研究方向：研究生：指導(dǎo)教師：完成時(shí)間：農(nóng)藥學(xué)生物農(nóng)藥羹小紅關(guān)雄教授陳i毒西教授二OO五年四月福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要絲棉鈴蟲的蛹為材料，通過硫酸銨沉淀分級(jí)分離、SephadexG200分子篩柱層析和DEAE32離子交換柱層析純化，獲得聚丙烯酰胺凝膠電泳單一純的N乙酰13D

2、氨基葡萄糖苷酶酶(NAGase，EC32152)制劑。純酶的比活力為267879U／mg。酶催化對(duì)硝基苯N乙酰13D氨基葡萄糖水解的最適pH為563，最適溫度為55“C。該酶在pH4～8區(qū)域較穩(wěn)定，而在pH8能迅速失活；酶促反應(yīng)符合米氏方程，島。為01629mmol／L，／“m為1073lamol／L／min，活化能為6624kJ／mol。酶分子的分子量為893kD。研究金屬離子對(duì)棉鈴蟲NAGase活力的影響。結(jié)果表明，Na、K十和Li

3、十等金屬離子對(duì)酶活力沒有任何影響。M92、ca2、C02對(duì)酶活力影響不顯著，Zn2、Cu”、Cd2、AI”、Hf和pb2對(duì)該酶有不同程度的抑制作用。研究Cu2、A13、zn2、H92和Pb2的抑制作用動(dòng)力學(xué)，結(jié)果表明：這些金屬離子對(duì)酶均表現(xiàn)為可逆抑制作用，Cu2的抑制類型為混合型，抑制常數(shù)嫡為O23mmoFL，K1s為149mmol／L。A1”為競(jìng)爭(zhēng)性類型，抑制常數(shù)為為642mmol／L。H92為混合型，抑制常數(shù)局為28430mol／L

4、，蝎s為225世nol／Lmmol／L。Pb2為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，抑制常數(shù)蝎s為O3208mmol／L。zn2為競(jìng)爭(zhēng)性類型，抑制常數(shù)局為1158mmol／L。zd對(duì)酶的pH穩(wěn)定性的影響不明顯，而有Zn2存在時(shí)，在3040“(2范圍內(nèi)，酶是穩(wěn)定的，溫度高于50℃后，隨著Zn2濃度的增加，酶的熱失活程度可以緩解。用金屬螯合劑(EDTA)處理棉鈴蟲NAGase后可使酶活力完全喪失，說明該酶活力的發(fā)揮與某些的金屬離子有關(guān)。研究幾種有機(jī)溶劑對(duì)棉鈴蟲N