墨蘭組培體系的優(yōu)化及根狀莖在生物反應器內培養(yǎng)的研究.pdf

1、墨蘭是一種極具觀賞價值的高檔蘭花，但因其繁殖系數低，規(guī)模化生產受到阻礙，組織培養(yǎng)是解決這一問題的重要途徑。本研究為了建立墨蘭組培快繁體系，以墨蘭根狀莖為外植體，調查了影響墨蘭根狀莖增殖，芽分化和生根的若干因素；此外，利用氣升式生物反應器影響根狀莖增殖培養(yǎng)的幾種理化參數進行了研究，為墨蘭種苗的規(guī)模化生產提供理論依據。
　　通過研究影響墨蘭根狀莖增殖的因素，本研究結果表明當花寶一號（H1）和花寶二號（H2）單獨使用時，墨蘭根狀莖的生長

2、及增殖效果不及MS培養(yǎng)基，但當H1和H2混合使用（H12）時明顯好于MS培養(yǎng)基。BA和NAA的混合使用有利于根狀莖的增殖生長，當H12培養(yǎng)基中加入BA2 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1時，根狀莖分化數多且鮮重和干重良好；糖種類對根狀莖增殖生長影響較大，在H12+BA2 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1培養(yǎng)基中加入30 g·L-1的蔗糖或食用白糖時增殖效果最佳，其次是葡萄糖，果糖不利于根狀莖增殖培養(yǎng)，因根狀莖增殖在蔗糖和

3、食用白糖無明顯差異，所以可用白糖代替蔗糖。
　　為了從組培根狀莖中誘導綠芽，本文對BA和NAA濃度的影響進行了研究，NAA0.2 mg·L-1和BA4 mg·L-1＋食用白糖30 g·L-1＋瓊脂7.0 g·L-1的培養(yǎng)基中芽分化數最多，生長狀態(tài)最好。此外，研究墨蘭試管苗適宜生根的培養(yǎng)基，結果發(fā)現H12培養(yǎng)基中加入NAA1.0 mg?L-1可促進試管苗生根。
　　利用氣升式生物反應器可大量增殖墨蘭根狀莖，其增殖效果顯著好于固

4、態(tài)培養(yǎng)基培養(yǎng)和液態(tài)培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)。墨蘭根狀莖在完全浸沒式反應器中增殖效果好于接觸式反應器培養(yǎng)，在3 L反應器中接種15 g根狀莖進行完全浸沒培養(yǎng)45 d后，根狀莖鮮重可達145.5 g，增殖系數為8.7，顯著好于10 g和20 g接種量處理；活性炭濃度為0.3 g·L-1時，其根狀莖鮮重和增殖系數均顯著優(yōu)于其它處理，分別為151.2 g和9.08；0.10 vvm是促進墨蘭根狀莖增殖的最適宜通氣量，過高或過低都不利于根狀莖的增殖生長；光