茯苓水溶性多糖預防大鼠腎結(jié)石形成作用機制研究.pdf

1、目的:泌尿系結(jié)石是泌尿系統(tǒng)最常見、最痛苦的疾病之一。在世界各地，它的發(fā)病率有所不同，在亞洲發(fā)病率為1-5％，在歐洲為5-9％，北美洲為13％，沙特阿拉伯為20％，世界上只有極少的地區(qū)泌尿系結(jié)石的發(fā)病率較低，如格陵蘭、日本沿海地區(qū)。同其他疾病不同，泌尿系結(jié)石可以追溯到人類的遠古時期。大約80％的泌尿系結(jié)石由草酸鈣組成。泌尿系結(jié)石可以引起尿路梗阻、感染、血尿、腎積水和腎功能不全。隨著腔內(nèi)泌尿外科技術的發(fā)展和體外震波碎石技術的引入，在泌尿系結(jié)

2、石治療方面取得了很大進展。目前，泌尿系結(jié)石病人很少接受開放手術治療。接受ESWL治療的病人可以出現(xiàn)出血、高血壓、腎小管壞死、腎臟纖維化、急性腎臟功能損傷、腎功能下降和導致結(jié)石復發(fā)率升高。而且，泌尿系結(jié)石的一個非常顯著的特點是其高復發(fā)率。據(jù)報道，在沒有采取任何預防措施的情況下，泌尿系結(jié)石1年復發(fā)率接近10％，5年復發(fā)率33％，10年復發(fā)率50％，15年復發(fā)率高達75％。至今沒有有效的方式預防泌尿系結(jié)石的復發(fā)。腎結(jié)石的形成是一個復雜的過程，

3、由過飽和、晶核形成、結(jié)晶生長、結(jié)晶聚集、結(jié)晶腎小管滯留等幾個階段構成。從廣泛上來講，腎結(jié)石可以分為兩大類:組織附著型結(jié)石和組織非附著型結(jié)石。腎上皮細胞暴露于草酸/草酸鈣結(jié)晶時可以導致活性氧產(chǎn)量增加，氧化應激增強，繼發(fā)細胞損傷和炎癥。到目前為止，腎上皮細胞損傷在腎結(jié)石的發(fā)展中起重要作用這一觀點已經(jīng)得到大多數(shù)專家的認同。據(jù)報道，在人類、動物實驗、體外實驗的研究中已經(jīng)得出結(jié)論:泌尿系結(jié)石存在時氧化應激升高。草酸鹽可以升高氧化應激，抗氧化可以降

4、低氧化應激。自由基、和擁有非成對電子的分子和原子統(tǒng)稱為活性氧。活性氧具有很強的活性，同時在很多信號旁路中起重要作用。另外，它們可以對很多細胞成分產(chǎn)生損害和化學修飾，如核苷酸、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、碳水化合物?；钚匝踔饕ㄑ趸瘉喌杂苫?、羥自由基、過氧化氫、和超氧陰離子。氧化亞氮自由基主要由內(nèi)皮細胞氧化亞氮自由基合成酶介導的L-精氨酸的氧化時生成。超氧陰離子主要是黃嘌呤氧化酶、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶、血紅素氧化酶、脂氧化酶、環(huán)氧合

5、酶等酶的產(chǎn)物、和作為呼吸鏈的副產(chǎn)物生成。脂自由基同樣可以產(chǎn)生超氧陰離子。內(nèi)皮細胞氧化亞氮自由基合成酶產(chǎn)生超氧陰離子的能力超過產(chǎn)生氧化亞氮自由基的能力。氧化亞氮自由基和超氧陰離子之間反應可以產(chǎn)生具有高反應性的過氧化亞硝酸鹽ONOO-。細胞自身同時配備有清除活性氧的系統(tǒng)，如清除超氧陰離子的超氧化物歧化酶、清除過氧化氫的谷胱甘膚過氧化物酶和過氧化氫酶。在正常狀態(tài)下，細胞通過相應的酶系嚴格控制活性氧的產(chǎn)生，并參與相應的調(diào)控系統(tǒng)和信號旁路。但是，

6、活性氧的過量生產(chǎn)和/或細胞抗氧化能力的降低可以導致氧化應激的發(fā)展。因為活性氧存在時間短和運動能力低，氧化應激認為是活性氧和碳水化合物、蛋白質(zhì)、核苷酸、脂質(zhì)之間反應的副產(chǎn)物所致。丙二醛、氧化脂質(zhì)是活性氧誘導的氧化應激的主要副產(chǎn)物。氧化應激可以損傷細胞的所有組成成分，并可被抗氧化劑擬制。植物藥物自從人類歷史出現(xiàn)記載后就已經(jīng)開始應用，至今已有幾千年的歷史。目前，自然植物藥物已在亞洲廣泛應羯，同時在歐洲、美國也獲得越來越多的人認同。有很多植物藥

7、物自古就用于防治泌尿系結(jié)石并取褥良好效果，但是這些植物藥物防治泌尿系結(jié)石的具體作用機制仍未清楚。茯苓是最常見的傳統(tǒng)中國植物藥物之一，并在防治泌尿系結(jié)石方面得到廣泛應用。茯苓水溶性多糖在茯苓中含量較少，是其在水中提取的主要活性物質(zhì)。β-（1-3）-D-多糖是茯苓中的主要成分，但基本沒有任何生物活性，但是其衍生物已被實驗證實具有抗腫瘤等活性。在本實驗中，我們想研究茯苓水溶性多糖預防大鼠草酸鈣腎結(jié)石形成中的作用機制。
　　 方法:在雄

8、性Wistar大鼠研究茯苓水溶性多糖預防大鼠腎結(jié)石形成的作用機制。應用0.8％乙二醇和1％氯化銨8天誘導大鼠成石。除了應用乙二醇/氯化銨外，另外給予茯苓水溶性多糖溶液灌胃(150mg/kg)，陽性對照組給予乙二醇/氯化銨，陰性對照組大鼠正常飲水，同時給予自來水灌胃。每組大鼠包括6只大鼠。8天后，收集24小時尿并測量尿Ph值、鈣、鎂、草酸含量，左腎用于草酸鈣結(jié)晶沉積評價，應用elisa法測量右腎MDA、SOD、CAT含量。
　　

9、結(jié)果:陰性對照組大鼠體重正常增長，陽性對照組大鼠體重明顯減輕，茯苓水溶性多糖干預組大鼠體重減輕程度小于陽性對照組。陽性對照組大鼠每個大鼠腎臟切片均有結(jié)晶沉積，茯苓水溶性多糖干預組大鼠腎臟切片結(jié)晶沉積評分明顯低于陽性對照組。陽性對照組大鼠尿量同陰性對照組大鼠無明顯變化，茯苓水溶性多糖干預組尿量同陽性對照組比較明顯增加。茯苓水溶性多糖干預組大鼠尿草酸含量少于陽性對照組，但無明顯差異，但陽性對照組、茯苓水溶性多糖干預組大鼠尿草酸含量同陰性對照

10、組具有明顯差異。茯苓水溶性多糖干預組大鼠尿鎂含量較陰性對照組、陽性對照組明顯升高。陽性對照組大鼠腎臟SOD、CAT較陰性對照組含量明顯降低，MDA含量明顯升高。而茯苓水溶多糖干預組大鼠腎臟SOD、CAT含量較陽性對照組明顯升高，MDA含量明顯降低。
　　 結(jié)論:對乙二醇/氯化銨誘導的大鼠應用茯苓水溶性多糖溶液灌胃，可以有效的預防泌尿系結(jié)石的形成。其預防泌尿系結(jié)石的機制有可能與茯苓水溶性多糖的利尿作用、升高尿鎂含量和擬制氧化應激作