Y染色體微缺失和單倍群對(duì)精子發(fā)生障礙的影響.pdf

1、目的:Y染色體長(zhǎng)臂(Yq)無(wú)精子因子(AZF)區(qū)域微缺失是導(dǎo)致男性不育的重要遺傳因素之一。AZF微缺失對(duì)精子發(fā)生障礙的遺傳學(xué)風(fēng)險(xiǎn)，其基因型與表型的關(guān)系有待于進(jìn)一步闡明。在不同Y染色體遺傳背景下，AZF缺失呈現(xiàn)不同的發(fā)生頻率，并對(duì)精子的發(fā)生因種族不同而有差異。以SNaPshot為代表的微測(cè)序新技術(shù)，可快速對(duì)Y染色體單倍群分型,已用于Y染色體相關(guān)的人類學(xué)研究。本研究首先對(duì)大樣本人群進(jìn)行Y染色體微缺失檢測(cè)，探討不同缺失類型在生精障礙患者中的分

2、布頻率；其次研究AZFc部分缺失與全缺失對(duì)精子發(fā)生的關(guān)系，研究AZFc部分缺失在漢族男性中分布規(guī)律，進(jìn)而揭示精子發(fā)生障礙的未知遺傳風(fēng)險(xiǎn)因子；第三，運(yùn)用微測(cè)序技術(shù)SNaPshot，對(duì)生精障礙患者與正常捐精者進(jìn)行Y染色體分型，探討Y染色體單倍群對(duì)微缺失的發(fā)生與精子發(fā)生障礙的影響。 材料與方法: 第一部分 Y染色體微缺失對(duì)精子發(fā)生障礙的影響實(shí)驗(yàn)組選擇815例漢族男性特發(fā)性非梗阻性無(wú)精子癥（NOA）患者，對(duì)照組選用上海人類精子庫(kù)

3、合格捐精者301例。參考?xì)W洲男科協(xié)會(huì)（EAA）和歐洲分子遺傳實(shí)驗(yàn)質(zhì)控網(wǎng)（EMQN）Yq AZF 微缺失檢測(cè)指南，對(duì)Y染色體序列標(biāo)簽點(diǎn)（STS）引物序列和PCR反應(yīng)條件優(yōu)化改良，篩查AZFa、b、c區(qū)域的微缺失。 第二部分 Yq AZFc部分缺失與全缺失對(duì)漢族男性精子發(fā)生的影響按照“WHO男性不育標(biāo)準(zhǔn)化診療手冊(cè)”標(biāo)準(zhǔn)，臨床選擇漢族NOA 458例作為實(shí)驗(yàn)組；合格捐精者301例作為對(duì)照組。采用多重PCR，檢測(cè)AZFc部分缺失（gr/

4、gr缺失與b2/b3缺失）和AZFc全缺失在漢族NOA患者和正常捐精者中的發(fā)生率。 第三部分 Y染色體單倍群與漢族男性精子發(fā)生障礙按照“WHO男性不育標(biāo)準(zhǔn)化診療手冊(cè)”標(biāo)準(zhǔn)，選擇漢族男性NOA患者200例作為實(shí)驗(yàn)組，合格捐精者200例作為對(duì)照組。采用多重PCR方法，檢測(cè)兩組人群中Y染色體微缺失及AZFc部分缺失。運(yùn)用SNaPshot技術(shù)檢測(cè)漢族男性Y染色體常見(jiàn)13個(gè)雙等位基因位點(diǎn)，對(duì)漢族男性進(jìn)行Y染色體單倍群分型。研究分析Y染色體

5、微缺失及AZFc部分缺失在漢族男性Y染色體單倍群中分布規(guī)律。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組Y染色體微缺失率為11.78（96/815）％，其中AZFa缺失發(fā)生率0.37％，占微缺失總數(shù)的3.13％；AZFb缺失率0.37％，占微缺失總數(shù)的3.13％；AZF c缺失率7.98％，占微缺失總數(shù)的67.71％；AZF bc缺失率2.21％，占缺失總數(shù)的18.75％；AZF abc缺失率0.86％，占微缺失總數(shù)的7.29％。正常捐精者中未檢測(cè)出Y染色體

6、微缺失。兩組結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，微缺失發(fā)生率有非常顯著差異。 通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)組458例NOA患者和301例合格捐精者的研究發(fā)現(xiàn)，Y染色體部分缺失及全缺失檢測(cè)結(jié)果為：實(shí)驗(yàn)組gr/gr缺失發(fā)生率8.90（41/458）％，b2/b3缺失率2.40（11/301）％，AZFc全缺失4例；對(duì)照組gr/gr缺失發(fā)生率8.31（25/301）％；b2/b3缺失率2.33（7/301）％，未發(fā)現(xiàn)有AZFc全缺失。兩組gr/gr與 b2/b3缺失發(fā)生

7、率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組AZFc全缺失發(fā)生率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各200例受試者的Y染色體單倍群分布進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組中g(shù)r/gr缺失有8.50％(17/200)，對(duì)照組7.50％(15/200)；實(shí)驗(yàn)組中b2/b3缺失有3.00％(6/200)，對(duì)照組2.50％(5/200)。兩組漢族男性在所選的13個(gè)Y染色體單倍群中幾乎均有分布；單倍群K*、DE、N*、O*在所檢測(cè)漢族男性中分布較少；gr/gr缺失在所檢測(cè)13個(gè)單

8、倍群中廣泛分布，有9個(gè)單倍群中出現(xiàn)gr/gr缺失；b2/b3在單倍群N中分布較為集中；此外單倍群C、O3*有少量分布。AZFc全缺失也有較廣的分布,但未發(fā)現(xiàn)與漢族男性精子發(fā)生障礙易感的Y染色體單倍群。 結(jié)論:通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)：Y染色體微缺失是引起男性生精功能障礙的重要分子遺傳學(xué)因素，對(duì)于不明原因的生精功能障礙患者進(jìn)行Y染色體微缺失的分子診斷有重要意義。Gr/gr缺失、b2/b3缺失不能作為漢族男性生精功能障礙的危險(xiǎn)因素，可能為Y染