納米金粒子的制備及其在免疫分析中的應用.pdf

1、隨著納米科技的興起,納米金粒子以其獨特的光學、電學性質在許多領域表現(xiàn)出潛在的應用價值,引起了人們濃厚的研究興趣。由于不存在內源酶干擾及放射性同位素污染等問題，納米金粒子作為標記物或顯色劑應用于免疫診斷和免疫分析中，逐漸取代傳統(tǒng)的三大標記技術，也逐漸有取代酶聯(lián)免疫分析等檢測方法的趨勢。因此探索用納米金粒子標記建立快速簡便的免疫學定量檢測方法，有重要的研究意義。本文主要是建立新穎的納米金粒子標記的免疫分析方法。 為了制備尺寸均一、單

2、分散的納米金粒子，本文采用兩種水相合成納米金粒子的方法，選擇不同的配方及條件，制備粒徑不同的金顆粒。然后進行納米金粒子對蛋白質的標記，主要采用兩種方法，其一是抗體蛋白在一定pH條件下通過靜電和配位作用與納米金粒子相互連接，利用納米金粒子的熒光淬滅性質，以及粒子表面的Zeta電位探索納米金粒子與蛋白質的連接機理，尋找最佳的連接條件。其二是將抗體蛋白進行水解還原后產(chǎn)生Fab’片段，裸露出巰基，與納米金粒子形成穩(wěn)定的Au－S共價鍵，從而進行標

3、記。比較兩種標記方法，選擇較好的方法應用于免疫學檢測。 利用納米金粒子的光學性能和熒光淬滅性能，建立兩種新穎的免疫分析方法，即免疫納米金凝集分光光度法和熒光淬滅分析法，檢測兩種常用的腫瘤標志物即癌胚抗原和甲胎蛋白，應用于疾病的診斷。 免疫納米金凝集分光光度法是采用納米金顆粒分別標記癌胚抗原相匹配的兩種抗體，通過免疫反應形成金標記抗體1－抗原－金標記抗體2復合物，研究反應溶液中復合物光學性質的變化，尋找定量免疫分析的方法，

4、建立納米金標記免疫凝集光度法，定量檢測癌胚抗原，最低檢測極限為15ng/mL。該方法只需檢測納米金粒子的光吸收變化就可檢測癌胚抗原的濃度，不需要分離抗原抗體的復合物，可直接檢測，簡單方便。 免疫納米金熒光淬滅分析法是采用納米磁粒子和納米金粒子分別標記甲胎蛋白相匹配的兩種抗體，通過免疫反應在磁顆粒表面形成抗原抗體復合物。在磁場的作用下，分離復合物與游離的納米金標記物，在游離物中加入熒光物質——異硫氰酸熒光素，熒光信號淬滅，研究在5