BMSCs移植對(duì)缺血性腦卒中鼠IL-l0、TGF-β1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　制備大鼠大腦中動(dòng)脈缺血（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，采用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）移植治療缺血性腦卒中大鼠，觀察大鼠神經(jīng)功能評(píng)分，檢測(cè)血清及腦組織中炎癥因子IL-l0、TGF-β1的變化，探討B(tài)MSCs移植對(duì)大鼠缺血再灌注腦損傷的修復(fù)作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　選體重約100g左右雄性SD大鼠

2、斷頸處死后取其長(zhǎng)骨的骨髓細(xì)胞，經(jīng)過(guò)全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)BMSCs，取3-5代細(xì)胞用生理鹽水稀釋并定容制成2×106/ml細(xì)胞混懸液備用。
　　利用改良線栓法制作SD大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型（MCAO）。將健康成年的36只雄性SD大鼠完全隨機(jī)分為三組，A組為正常對(duì)照組（n=4），不給于任何處理；B組為模型對(duì)照組（n=16），造模成功后予以等劑量生理鹽水注射；C組為細(xì)胞移植組（n=16），造模成功后予以BMSCs移植干預(yù)，缺血2h，再

3、灌注24小時(shí)后，將2×106個(gè)MSCs通過(guò)尾靜脈途徑移植入MCAO大鼠體內(nèi)。分別于移植后第1、3、7、14天不同時(shí)間點(diǎn)觀察神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，處死亞組并取標(biāo)本，通過(guò)酶聯(lián)免疫試劑盒及Western blot的方法檢測(cè)大鼠血清及腦組織中炎癥因子IL-l0、TGF-β1的變化情況。
　　結(jié)果：
　　1、成功培養(yǎng)了SD大鼠BMSCs：光學(xué)顯微鏡下，原代BMSCs貼壁數(shù)量較少，多數(shù)呈圓形或者類圓形，經(jīng)過(guò)純化、擴(kuò)增后，貼壁細(xì)胞逐漸增多，呈長(zhǎng)

4、梭形，集落樣生長(zhǎng)，局部呈漩渦狀；隨著傳代次數(shù)的增加，傳至6～7代，細(xì)胞逐漸老化，生長(zhǎng)逐漸緩慢，形態(tài)逐漸趨于一致，以扁平細(xì)胞為主，胞體飽滿。免疫熒光法檢測(cè)BMSCs表面特異性抗原:CD34(-)，CD54(+)。
　　2、神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分:A組0+0.00，各時(shí)間點(diǎn)第1天:B組3.50+0.27，C組3.21±0.57；3天:B組3.45+0.45，C組3.01±0.35；7天:B組3.21+0.25，C組2.72±0.34；14天:

5、B組2.83+0.52，C組2.31±0.24。B、C各組評(píng)分明顯高于A組（P<0.01）。1天中B組和C組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。3天、7天及14天中C組明顯低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3、MCAO大鼠血清IL-10的變化：A組10.11±0.55，各時(shí)間點(diǎn)第1天：B組35.23±1.27，C組55.51±2.51；3天：B組28.82±0.78，C組46.55±0.91；7天：B組25.18

6、±0.53，C組37.12±1.38；14天：B組16.09±1.26，C組28.43±0.62。B、C各組血清IL-10水平明顯高于A組（P<0.01）。第1、3、7、14天組IL-10的表達(dá)逐漸下調(diào)，但C組血清IL-10水平明顯高于B組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、MCAO大鼠血清TGF-β1的變化：A組16.00±0.81，各時(shí)間點(diǎn)第1天：B組69.21±1.25，C組88.38±0.67；3天：B組52.3

7、2±1.24，C組73.77±1.02；7天：B組42.71±0.54，C組54.62±1.72；14天： B組33.32±1.24，C組40.72±0.99。第1、3、7、14天中B、C組血清TGF-β1水平明顯高于A組（P<0.01）。C組血清TGF-β1水平明顯高于B組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且隨著1、3、7、14天時(shí)間的推移，B、C組血清TGF-β1的表達(dá)逐漸下調(diào)。
　　5、MCAO大鼠腦組織中IL-10、TG