桃紅四物湯對大鼠激素性股骨頭缺血性壞死TGF-β-,1-表達的實驗研究.pdf

1、目的：建立大鼠激素性股骨頭缺血性壞死模型，觀察桃紅四物湯對激素性股骨頭缺血性壞死大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1，TGF—β1)表達的影響，探討桃紅四物湯防治激素性股骨頭壞死的作用機制，進一步為活血化瘀法防治激素性股骨頭缺血性壞死和臨床推廣應用提供理論依據(jù)。 方法：采用清潔級SD大鼠40只，雌雄各半，體重200±20g，首先隨機分為兩組：空白組4只和模型組36只，模型組每周2次腹腔

2、注射醋酸潑尼松龍24.5mg/kg，經(jīng)6周誘導出激素性股骨頭缺血性壞死的早期模型；空白組每周2次腹腔注射同等劑量的生理鹽水。6周后處死空白組4只和模型組4只，進行光、電鏡觀察，確定造模成功；隨后將其余32只模型組大鼠隨機分為治療組16只和對照組16只，分別灌服中藥和生理鹽水，于灌胃后第6、8周時期在麻醉下，腹主動脈取血，化學比色法檢測血清中堿性磷酸酶、Elisa(酶聯(lián)免疫吸附法)檢測血清中TGF-β1的含量；應用RT—PCR(反轉(zhuǎn)錄-聚

3、合酶鏈反應)技術(shù)檢測股骨頭局部TGF—β1mRNA的轉(zhuǎn)錄，免疫組化法檢測股骨頭局部微血管密度和股骨頭局部TGF-β1的表達。 結(jié)果：1、大體觀察：短期內(nèi)大劑量使用激素使模型組動物體重一直下降，灌胃后，治療組動物體重較對照組體重回升顯著(P<0.05)。2、組織病理學觀察：激素可使模型組空缺骨陷窩數(shù)明顯增多，骨小梁細疏，髓腔脂肪細胞增大、增多，與空白組有明顯差異(P<0.01)。3、電鏡觀察：模型組骨細胞數(shù)量減少，退變固縮或出現(xiàn)出

4、現(xiàn)脂滴，成骨細胞減少，髓內(nèi)脂肪細胞增大、增多，空白組骨細胞富含粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，多聚核糖體多，線粒體發(fā)達，嵴結(jié)構(gòu)清晰，核異染色質(zhì)豐富，核仁可見。4、股骨頭局部血管微密度：治療組股骨頭局部血管微密度逐漸增高，對照組股骨頭局部微血管密度較治療組明顯減低，兩組相比有明顯差異(P<0.01)。5、免疫組化檢測TGF-β1的表達，圖像分析儀分析：治療組股骨頭局部TGF—β1較對照組表達明顯增強，兩組有明顯差異(P<0.01)。6、血清中堿性磷酸酶含量檢

5、測：對照組血清中堿性磷酸酶含量增高，與對照組相比，兩組有顯著差異(P<0.01)。7、血清中TGF—β1含量檢測：治療組血清中TGF—β1的表達增強，與對照組相比有明顯差異(P<0.01)。8、股骨頭局部TGF-β1mRNA的轉(zhuǎn)錄：治療組在第6周時表達即增強，在第8周時表達又降低，而對照組在第6周時表達減少，在第8周時未檢測到TGF—β1mRNA的表達，兩組差異顯著(P<0.05，P<0.01)。TGF—β1mRNA與血清和股骨頭局部T

6、GF—β1的表達具有一致性。 結(jié)論：1、大鼠腹腔醋酸潑尼松龍注射加間斷立位股骨頭缺血性壞死造模穩(wěn)定，重復性好。2、桃紅四物湯能通過促進激素性股骨頭缺血性壞死大鼠模型股骨頭局部TGF-β1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，促進股骨頭局部TGF-β1表達。3、桃紅四物湯能通過促進激素性股骨頭缺血性壞死大鼠模型TGF-β1的表達，從而可以有效促進股骨頭局部微血管的再生。4、桃紅四物湯能對抗激素的作用，拮抗激素引起的骨質(zhì)破壞，降低血清中ALP的含量。