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文檔簡介
1、目的:建立兩種性別的小鼠胚胎干細(xì)胞實(shí)驗(EST)模型,用致畸背景已知的模式化合物進(jìn)行暴露后,根據(jù)分子生物學(xué)終點(diǎn)數(shù)據(jù)驗證所建立的模型評價胚胎毒性的有效性,并用該模型評價新興污染物中全氟辛磺酸鹽(PFOS)和十溴聯(lián)苯醚(BDE209)的胚胎毒性。
方法:體外培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞3T3和小鼠胚胎干細(xì)胞R1系和SP3系,通過形態(tài)學(xué)觀察、堿性磷酸酶(AKP)染色和干性標(biāo)記物Oct4和Ssea-1基因的表達(dá)情況對ES進(jìn)行多能鑒定;利用X染色
2、體和Y染色體特異性的基因Zfx和Sry對ES的性別進(jìn)行鑒定;之后誘導(dǎo)兩種ES細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化,并用心肌特異性標(biāo)記物心肌蛋白輕鏈(MLC)對分化的具搏動能力的細(xì)胞進(jìn)行鑒定,并比較不同細(xì)胞密度在相同分化操作條件下分化為具搏動能力心肌細(xì)胞的陽性率;在確定定向誘導(dǎo)分化方法可行的前提下,使細(xì)胞暴露于不同濃度的模式化合物后計算各化合物的半數(shù)致死劑量(IC50)和半數(shù)分化抑制劑量(ID50),并根據(jù)歐洲替代試驗方法驗證中心(EURL ECVAM)提
3、出的胚胎毒性評價方法,驗證建立的EST模型對化合物致畸可能性評價的有效性;進(jìn)一步用建立的有效的EST模型,獲得新興污染物中PFOS和BDE209的IC50和 ID50,并進(jìn)行胚胎毒性評價。
結(jié)果:1.成功建立了基于R1 ES和SP3 ES的兩種性別的EST模型;
2.建立的EST模型評價模式化合物結(jié)果與模式化合物的背景一致,即所建立的EST模型可準(zhǔn)確評價化合物的胚胎毒性;
3.PFOS對3T3細(xì)胞的IC50
4、為33.18±1.57μg/ml,對R1 ES的IC50為22.34±1.23μg/ml,對SP3 ES的IC50為20.74±1.04μg/ml,對R1 ES的ID50為55.06±3.73μg/ml,對SP3 ES的ID50為52.08±4.48μg/ml;根據(jù)EST的判斷標(biāo)準(zhǔn),兩個EST模型均判斷PFOS為弱胚胎毒性化合物;
4. BDE209對3T3細(xì)胞的IC50為30.06±2.19μg/ml,對R1 ES的IC50
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