黃連屬藥用植物RAPD鑒定與親緣關(guān)系研究.pdf

1、中藥材黃連為毛茛科黃連屬植物黃連CoptischinensisFranch.及其同屬植物的干燥根莖。《日本藥局方》收載了日本黃連CoptisjaponicaMakino.，同時(shí)，各地還有多種栽培或野生黃連如三角葉黃連C.deltoideaC.Y.ChengetHsiao、云南黃連C.teetoidesC.Y.Cheng、峨嵋野連C.omeiensis(Chen)C.Y.Cheng、西藏黃連C.teetaWall.及線萼黃連C.linea

2、risepalaT.Z.WangetC.k.hsieh等作為藥用。 論文旨在通過(guò)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA(RAPD)技術(shù)，1)研究黃連屬藥用植物種間的遺傳特征，鑒別該屬植物，探討物種間的親緣關(guān)系，為黃連屬藥用植物的鑒定建立新方法，為形態(tài)分類(lèi)提供分子水平的依據(jù)；2)研究川黃連種內(nèi)遺傳變異，為川黃連的道地性提供分子生物學(xué)依據(jù)；3)探索黃連屬藥用植物遺傳特征與主要生物堿含量的關(guān)系。 采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)法(CCD)優(yōu)化RAPD-PCR反應(yīng)體

3、系，揭示RAPD-PCR反應(yīng)體系中的Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物和模板DNA5個(gè)重要因素之間存在交互作用，優(yōu)化各因素后，建立的RAPD-PCR反應(yīng)體系，其穩(wěn)定性與重復(fù)性良好，適合用于黃連屬藥用植物RAPD擴(kuò)增。 應(yīng)用RAPD技術(shù)構(gòu)建了黃連屬藥用植物DNA指紋圖譜，采用數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)算了各種群的遺傳距離和性狀差異，構(gòu)建了UPGMA聚類(lèi)樹(shù)，結(jié)果表明：1)黃連屬藥用植物種間遺傳多態(tài)性豐富，RAPD技術(shù)能有效用于該屬物種

4、鑒定。 2)日本黃連與其它各種親緣關(guān)系均較遠(yuǎn)，云南黃連與西藏黃連、黃連與線萼黃連親緣關(guān)系較近。 3)親緣關(guān)系近的種群HPLC法測(cè)定的小檗堿、藥根堿和巴馬汀的含量也接近。 四川為中藥黃連的道地產(chǎn)區(qū)，本文應(yīng)用RAPD技術(shù)比較了洪雅、彭州、石柱(重慶)川黃連的遺傳特征，結(jié)果表明：川黃連種內(nèi)的遺傳變異小，不同地理居群間與居群內(nèi)的性狀沒(méi)有顯著差異，作為道地藥材具有穩(wěn)定的遺傳性狀，HPLC法測(cè)定的三個(gè)不同產(chǎn)地的川黃連小檗堿、