蛇葡萄屬藥用植物DNA分子鑒定及化學(xué)成分分析.pdf

1、本研究運(yùn)用ITS2序列及psbA-trnH序列對葡萄科蛇葡萄屬藥用植物及其近緣種21個物種、125份實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行鑒定，并通過對所得序列進(jìn)行序列變異、遺傳距離及構(gòu)建系統(tǒng)鄰接樹分析，評估此兩種序列對蛇葡萄屬藥用植物及其近緣種的鑒定效率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　（1）通過對實(shí)驗(yàn)樣品 DNA的提取、擴(kuò)增、測序及序列驗(yàn)證，最終獲得了65條ITS2序列及122條psbA-trnH序列；蛇葡萄屬大葉蛇葡萄、顯齒蛇葡萄、廣東蛇葡萄及烏蘞莓屬、葡萄屬樣

2、品存在ITS2序列擴(kuò)增困難現(xiàn)象。
　?。?）蛇葡萄屬樣品ITS2序列比對后長度均為243bp，崖爬藤屬樣品ITS2序列比對后長度為251~254bp；蛇葡萄屬大葉蛇葡萄、顯齒蛇葡萄、廣東蛇葡萄 psbA-trnH序列比對后長度為243~287bp，而該屬其他物種psbA-trnH序列比對后長度為353~359bp，葡萄屬樣品 psbA-trnH序列比對后長度為334bp，烏蘞莓屬樣品psbA-trnH序列比對后長度為324bp，崖

3、爬藤屬樣品psbA-trnH序列比對后長度為316~319bp；蛇葡萄屬物種兩個序列的變異位點(diǎn)皆較少且不穩(wěn)定。
　?。?）計(jì)算遺傳距離，蛇葡萄、異葉蛇葡萄、三裂蛇葡萄、牯嶺蛇葡萄ITS2序列種內(nèi)最大遺傳距離分別為0.021、0.004、0.004、0.008，種間最小遺傳距離均為0；白蘞 ITS2序列種內(nèi)遺傳距離為0，種間最小遺傳距離0.029。大葉蛇葡萄、顯齒蛇葡萄、廣東蛇葡萄、蛇葡萄、光葉蛇葡萄、異葉蛇葡萄、三裂蛇葡萄、牯嶺蛇

4、葡萄、白蘞psbA-trnH序列種內(nèi)最大遺傳距離分別為0.040、0.004、0.008、0.006、0、0.006、0.008、0.009、0，種間最小遺傳距離均為0。
　?。?）構(gòu)建系統(tǒng)鄰接樹，ITS2序列NJ樹結(jié)果顯示，總體分為兩支，蛇葡萄屬物種為一支，崖爬藤屬2份樣品為一支；蛇葡萄屬大支內(nèi)，白蘞單獨(dú)成支，其他物種聚為一支。psbA-trnH序列 NJ樹結(jié)果顯示，總體同樣分為兩支，烏蘞莓屬與崖爬藤屬兩小支聚為一大支，蛇葡萄屬

5、與葡萄屬兩支聚為一大支；蛇葡萄屬大支內(nèi)，大葉蛇葡萄、顯齒蛇葡萄、廣東蛇葡萄3個物種聚為一支，其他12個物種聚為一支，兩支內(nèi)沒有物種單獨(dú)分離出來。
　　采用高效液相色譜法對蛇葡萄屬藥用植物及其近緣種10個物種33份實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行化學(xué)成分比較分析。色譜條件為：Angilent TC-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相：乙腈-0.1％磷酸水(v/v)梯度洗脫，流速：0.7mL/min，柱溫：25℃，檢測波長：265nm