溫氏附紅細胞體抗原特性及16S rRNA基因系統(tǒng)進化分析研究.pdf

1、牛附紅細胞體病是由溫氏附紅細胞體(E.wenyoni)引起的一種傳染病。長期以來，由于該病多呈隱性感染，發(fā)病率較低，未引起人們的足夠重視。近年來研究發(fā)現(xiàn)，該病的發(fā)病率呈上升趨勢，成為影響?zhàn)B牛業(yè)發(fā)展的主要疾病之一。同時，國內(nèi)外對溫氏附紅細胞體的研究相對較少，有關形態(tài)學特性、分類地位、診斷準確性、有效預防等問題都亟待進一步研究。本試驗采用自然感染E.wenyoni的牛血為試驗材料，對E.wenyoni的抗原特性及其16SrRNA基因特點進行

2、了研究：首先，研究了E.wenyoni的形態(tài)學特點、運動性及其對牛血液學指標及免疫指標的影響，旨在探索E.wenyoni的致病機理，并為確診牛附紅細胞體病提供理論與實踐依據(jù)；其次，從自然感染牛血液中純化附紅細胞體，應用SDS-PAGE和免疫印跡試驗對E.wenyoni抗原蛋白組分進行了初步分析，為制備特異性診斷抗原、提高血清學診斷的特異性和準確性以及研制高效附紅細胞體疫苗奠定基礎；最后，對E.wenyoni16SrRNA基因進行了擴增，

3、對擴增產(chǎn)物進行克隆和測序，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹并進行分析，目的在于從系統(tǒng)進化角度探討E.wenyoni的分類學地位。 顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，被感染的紅細胞變形，E.wenyoni呈多形性，具有折光性，游離于血漿中的E.wenyoni具有運動性，附著于紅細胞上后，似乎停止運動，但實際上能使紅細胞發(fā)生震顫；血液學指標測定結(jié)果表明：隨著感染強度的增加，牛血液中紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白含量(HGB)和紅細胞比容(HCT)均降低，而白細胞數(shù)(WB

4、C)、紅細胞滲透脆性和紅細胞沉降率(ESR)卻增加；免疫指標測定結(jié)果顯示：高強度感染牛的紅細胞C3b受體花環(huán)(C3bRR)率、紅細胞免疫復合物花環(huán)(ICR)率以及血液中ANAE+T淋巴細胞百分率均降低，這表明牛嚴重感染后，紅細胞免疫及細胞免疫處于低下狀態(tài)。 SDS-PAGE結(jié)果顯示，E.wenyoni全蛋白分子量范圍為24kD～150kD，主要的9種蛋白質(zhì)分子量分別為141.34kD，107.27kD，86.03kD，68.05

5、kD，56.21kD，44.30kD，32.99kD，28.89kD，24.59kD。應用免疫印跡試驗篩選出了3種特異性蛋白質(zhì)，分子量分別為147.31kD，49.03kD，35.72kD。 克隆了E.wenyoni16SrRNA部分基因，測序結(jié)果顯示：所測序列與GenBank發(fā)表的E.wenyoni16SrRNA基因序列(AF016546)相似性最高，達97.9﹪。系統(tǒng)發(fā)育分析表明，所測序列與支原體屬病原代表種的序列接近，同源