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1、背景與目的:妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(IntrahepaticCholestasisofPregnancy,ICP)是一種以皮膚瘙癢、黃疸伴肝功能改變?yōu)樘卣鞯娜焉锲诩膊?。ICP圍生兒預(yù)后不良,胎兒窘迫發(fā)生率為32~65%,胎兒死亡率也比正常妊娠高4倍,發(fā)生機(jī)制不清。 目前對ICP胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)發(fā)生機(jī)制的研究主要集中在胎盤-胎兒灌注方面,而對胎兒自身重要臟器損傷所起的作用研究甚少。研究發(fā)現(xiàn)ICP時胎盤絨毛間腔狹窄、絨毛血管痙攣,使胎
2、盤灌流不足,在宮縮來臨或胎盤膜氧擴(kuò)散功能障礙等情況下可致使胎兒處于急性缺氧狀態(tài)甚至死亡。但也有研究證實ICP胎盤絨毛間腔狹窄僅引起胎盤氧儲備力下降,不足以導(dǎo)致胎兒于臨產(chǎn)前突然死于宮內(nèi)。新近研究發(fā)現(xiàn)?;悄懰峥墒剐律笫笮募〖?xì)胞發(fā)生Ca2+超載,心肌細(xì)胞收縮強(qiáng)度和心率顯著下降,出現(xiàn)心動過緩甚至停搏。對ICP胎兒尸檢發(fā)現(xiàn)在心包膜上存在大量急性、致死性淤點性出血。同時大量臨床觀察亦發(fā)現(xiàn)在ICP胎兒胎盤與臍動脈血流正常的情況下,可因?qū)m縮出現(xiàn)而突發(fā)
3、無任何征兆的胎死宮內(nèi)。以上研究提示,ICP發(fā)生胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)并非胎盤灌流減少單因素的結(jié)果,可能為多種因素共同作用的結(jié)果。心臟作為機(jī)體最重要的臟器之一,其功能異??赡芤矃⑴c了ICP胎兒并發(fā)癥的病理發(fā)生過程。 本實驗擬通過構(gòu)建兔妊娠肝內(nèi)膽汁淤積模型,觀察ICP胎兔心臟能量代謝的變化及在常氧和低氧灌流時胎兔離體心臟功能的改變,以明確ICP胎兔是否存在心臟功能損傷,其心臟對低氧灌注的耐受性是否下降,進(jìn)而初步探討ICP胎兒窘迫、胎死宮
4、內(nèi)的心源性因素。 方法:1.孕兔32只,隨機(jī)分為4組:高、中、低劑量組自妊娠第22天,分別頸后皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg·kg-1·d-1、0.1mg·kg-1·d-1、10.05mg·kg-1·d-1,對照組頸后皮下注射生理鹽水,直至分娩。觀察孕兔血生化指標(biāo)和肝臟病理改變,驗證孕兔是否出現(xiàn)肝內(nèi)膽汁淤積改變,以明確是否成功建立了兔ICP模型。2.將ICP組和對照組胎兔隨機(jī)分為低氧灌流ICP組(Ⅰ組)、常氧灌流ICP組(Ⅱ組)
5、、低氧灌流對照組(Ⅲ組)、常氧灌流對照組(Ⅳ組)。監(jiān)測心率(HR)、左心室最大收縮壓(LVDP)、左心室舒張末期壓(LVEDP)、左心室內(nèi)壓最大變化速率(±dp/dtmax)及冠脈流量(CF);測定灌流15min和30min時冠脈流出液磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌鈣蛋白I(CTn-I)含量;檢測心肌含水量;透射電鏡觀察灌流末心肌超微結(jié)構(gòu)改變。3.觀察ICP組和對照組胎兔心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),檢測心肌腺苷三磷酸(ATP)、超氧化物
6、歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量及心肌細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果:1.高、中劑量組孕兔血總膽汁酸(TBA)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘膽酸(CG)均顯著升高(P<0.01),總膽固醇(TCH)顯著下降(P<0.01),而低劑量組僅TBA、CG含量高于對照組(P<0.05);各劑量組均有胎死宮內(nèi)、早產(chǎn)的發(fā)生,高劑量組胎兔存活率僅11.9%,中劑量組胎兔存活率為54.4%;高、中劑量組肝臟組織HE染色見肝
7、細(xì)胞腫脹,部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見膽汁樣物質(zhì)沉積;高、中劑量組肝細(xì)胞電鏡觀察均可見線粒體腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,毛細(xì)膽管擴(kuò)張,肝細(xì)胞胞漿水腫、空化,偶見膽鹽樣物質(zhì);低劑量組與對照組肝臟組織病理改變不明顯。 2.ICP胎心在低氧灌流15min時,心率和心臟收縮功能即出現(xiàn)明顯的改變,其心搏動次數(shù)和心室最大收縮內(nèi)壓均較常氧灌流組下降50%左右,冠脈流量顯著下降,冠脈流出液CK-MB、CTn-I含量明顯增高;低氧灌流30min時,冠脈流量降至常氧
8、灌流組的10%左右,冠脈流出液CK-MB、CTn-I含量進(jìn)一步增高,左室舒縮功能明顯減弱,心臟搏動極度緩慢;心肌組織高度水腫。以上觀察指標(biāo)與常氧灌流ICP組和低氧灌流對照組相比均有顯著差異。常氧灌流30min內(nèi),ICP胎兔心臟功能無明顯改變。 3.ICP組胎心組織ATP、SOD含量減少,MDA含量和細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增多,與對照組相比均具有顯著差異(P<0.01);電鏡觀察見ICP組胎心線粒體輕度腫脹、脫髓鞘改變,胞質(zhì)內(nèi)糖原顆粒分布
9、減少。對照組超微結(jié)構(gòu)無明顯改變。 結(jié)論:1.孕兔皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg·Kg-1·d-1、0.1mg·Kg-1·d-1可出現(xiàn)類似人ICP的血生化、肝內(nèi)膽汁淤積和胎死宮內(nèi)的病理改變。用0.1mg·Kg-1·d-1劑量成功構(gòu)建了運(yùn)用于本試驗的ICP孕兔模型。2.在供氧充足的情況下,ICP胎兔心.臟舒縮功能不發(fā)生明顯改變;但I(xiàn)CP胎兔心臟對缺氧極為敏感,耐受性差,短時間的急性缺氧即可導(dǎo)致心臟舒縮功能嚴(yán)重紊亂,而且心功能損傷程度
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