腎絡(luò)癥瘕的生物學(xué)基礎(chǔ)及腎炎防衰液的干預(yù)研究.pdf

1、目的根據(jù)慢性腎臟疾病的臨床研究基礎(chǔ)，結(jié)合中醫(yī)絡(luò)病和癥瘕理論，提出了腎絡(luò)癥瘕病機(jī)理論。研究5/6腎切除腎小球硬化動(dòng)物模型的病理機(jī)制，探討腎絡(luò)癥瘕致“腎絡(luò)病”的病機(jī)及物質(zhì)、結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，以腎炎防衰液作為載體，研究其治療腎小球硬化的分子機(jī)制，為中西醫(yī)結(jié)合防治腎纖維化提供理論基礎(chǔ)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的資料，實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥學(xué)的基礎(chǔ)理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論實(shí)質(zhì)性的鏈接。 方法1采用5/6腎切除的方法制備大鼠腎小球硬化的動(dòng)物模型。于造模后17w采血，檢測(cè)血清CRE、

2、BUN含量；取大鼠腎組織常規(guī)石蠟包埋、切片，做HE染色、Mallory染色、六胺銀和Masson染色。 2以正常大鼠做陰性對(duì)照，采用免疫組化法檢測(cè)腎組織CTGF、FN及LN蛋白表達(dá)；采用原位雜交法檢測(cè)腎組織CTGF表達(dá)；采用Western-blot法檢測(cè)腎組織CTGF蛋白含量。 3造模結(jié)束后，將大鼠隨機(jī)分成8組：A正常大鼠作陰性對(duì)照(生理鹽水灌胃)，B假手術(shù)組(生理鹽水灌胃)，C模型組(生理鹽水代替藥物灌胃)，D陽(yáng)性藥治

3、療組(洛汀新)，E陽(yáng)性藥治療組(尿毒清)，F(xiàn)腎炎防衰液高劑量治療組，G腎炎防衰液中劑量治療組，H腎炎防衰液低劑量治療組，分別檢測(cè)術(shù)后1w，4w、8w、12w、15w五個(gè)時(shí)間點(diǎn)大鼠24h尿蛋白，血壓的變化，術(shù)后0w，2w、4w、6w、8w、10w、12w、14w八個(gè)時(shí)間點(diǎn)的體重變化，治療15w后取材。采用生化分析的方法檢測(cè)血清CRE、BUN含量；腎組織常規(guī)石蠟切片HE染色、Mallory染色、六胺銀和Masson染色；腎組織石蠟切片CTG

4、F、FN及LN免疫組化顯色；原位雜交法檢測(cè)腎組織CTGF表達(dá)；腎組織CTGF蛋白含量Western-blot分析。 4采用SPSS11.0軟件對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，求平均數(shù)，作單因素方差分析。 結(jié)果通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)得到下列結(jié)果：1腎纖維化進(jìn)行階段，血清中CRE、BUN含量顯著升高；2實(shí)驗(yàn)性腎纖維化存在不同的發(fā)病機(jī)制，5/6腎切除腎小球硬化主要病理特征是細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度積聚，主要表現(xiàn)是系膜基質(zhì)的增多或系膜區(qū)增寬，基底膜

5、增厚及不規(guī)則，腎小球毛細(xì)血管袢的閉塞并伴過(guò)濾面積的減少； 3CTGF過(guò)度表達(dá)是腎纖維化的關(guān)鍵因子，細(xì)胞外基質(zhì)FN，LN高表達(dá)是腎纖維化形成的重要因素； 4從腎小球硬化的病理機(jī)制得到腎絡(luò)癥瘕病機(jī)理論，中醫(yī)病機(jī)包括5個(gè)連續(xù)的病理階段：血行不暢、絡(luò)脈失養(yǎng)、氣血瘀滯、津凝痰結(jié)、絡(luò)毒蘊(yùn)結(jié)； 5腎炎防衰液抗腎纖維化的作用機(jī)制主要為： 5.1通過(guò)某種機(jī)制抑制機(jī)體產(chǎn)生CTGF，從而抑制細(xì)胞外基質(zhì)的積聚；5.2抑制細(xì)胞外基

6、質(zhì)FN，LN的表達(dá)，從而減緩腎纖維化的進(jìn)程；5.3保護(hù)腎細(xì)胞，修復(fù)腎細(xì)胞損傷，降低血CRE、BUN；5.4通過(guò)干預(yù)CTGF蛋白表達(dá)及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑而阻斷腎纖維化的進(jìn)行。 結(jié)論 通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及各指標(biāo)間關(guān)系的深入探討，研究結(jié)論如下：1腎小球硬化的主要表現(xiàn)是系膜基質(zhì)的增多或系膜區(qū)增寬，基底膜增厚及不規(guī)則，腎小球毛細(xì)血管袢的閉塞并伴過(guò)濾面積的減少的病理特征，其主要特點(diǎn)是細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度積聚； 2腎纖維化形成過(guò)程促纖維生