神經(jīng)肽Y及其受體在垂體腺瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、本課題目的就是探討NPY及其受體(Y1R和Y2R)在垂體腺瘤中的表達(dá)及其生物學(xué)意義。為此本實(shí)驗(yàn)首先通過雌激素誘導(dǎo)建立大鼠垂體泌乳素腺瘤模型，研究大鼠下丘腦和垂體中NPY及其受體的表達(dá)規(guī)律及其意義。在動物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本課題還探討了NPY及其受體在人垂體腺瘤中的表達(dá)特征及其生物學(xué)意義。具體做了以下工作： 第一部分動物實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯可窠?jīng)肽Y及其受體在實(shí)驗(yàn)大鼠垂體腺瘤以及下丘腦中的表達(dá)，探索NPY在垂體腺瘤形成過程中的作用。方法4周齡雌

2、性Wistar大鼠40只，摘除雙側(cè)卵巢后，將大鼠隨機(jī)等分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。通過腹腔注射雌激素的方法建立大鼠垂體腺瘤模型，經(jīng)內(nèi)分泌和組織病理學(xué)檢查對動物模型進(jìn)行鑒定并確定其內(nèi)分泌類型。采用放射免疫法測定大鼠血漿NPY的濃度，應(yīng)用免疫組化、免疫電鏡和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法分別研究兩組大鼠下丘腦和垂體中NPY及其受體(Y1R和Y2R)的表達(dá)。結(jié)果(1)實(shí)驗(yàn)組大鼠垂體重量為(52.35±4.97)mg，血清泌乳素濃度為(198

3、.23±93.07)ng/ml，大約是對照組垂體重量(12.02±0.77)mg和泌乳素濃度(50.12±14.24)ng/ml的4倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿NPY濃度為(6865.52±2898.31)pg/ml，明顯低于對照組血漿中NPY的濃度(9889.71±3779.19)pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)組垂體正常結(jié)構(gòu)消失，腺細(xì)胞形態(tài)多樣，排列紊亂，細(xì)胞核深染有異型性，而且可見紅細(xì)胞

4、溢出現(xiàn)象，符合垂體腺瘤的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)；免疫組化染色顯示實(shí)驗(yàn)組垂體腺瘤中泌乳素的表達(dá)水平顯著增高。(2)免疫組化和RT-PCR研究表明，在實(shí)驗(yàn)組大鼠下丘腦和垂體腺瘤中NPY的表達(dá)水平顯著低于對照組。(3)實(shí)驗(yàn)組大鼠垂體腺瘤中Y1R和Y2R基因表達(dá)明顯低于對照組垂體。(4)實(shí)驗(yàn)組大鼠下丘腦中Y1R基因表達(dá)明顯低于對照組，但兩組間大鼠下丘腦Y2R的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)免疫電鏡研究顯示NPY主要位于腺垂體細(xì)胞的分泌顆粒中。結(jié)論通過雌激素

5、誘導(dǎo)Wistar大鼠，成功建立了垂體泌乳素腺瘤動物模型；實(shí)驗(yàn)組大鼠下丘腦中NPY及其Y1R的表達(dá)下調(diào)與垂體腺瘤的發(fā)生有關(guān)，NPY可能通過下丘腦中Y1R參與調(diào)節(jié)垂體泌乳素腺瘤的形成；實(shí)驗(yàn)組大鼠垂體腺瘤中NPY及其受體(Y1R和Y2R)的表達(dá)下調(diào)可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。 第二部分臨床研究目的研究神經(jīng)肽Y及其受體在人垂體腺瘤中的表達(dá)，探索NPY對垂體腺瘤發(fā)生、發(fā)展以及其它生物學(xué)行為的影響。方法收集垂體腺瘤手術(shù)標(biāo)本以及相關(guān)臨床資料。通過免

6、疫組化觀察NPY在人垂體腺瘤中的表達(dá)特征，研究NPY的表達(dá)水平與不同類型垂體腺瘤的關(guān)系；采用免疫電鏡觀察NPY在垂體腺瘤亞細(xì)胞水平的定位表達(dá)，進(jìn)一步尋找NPY表達(dá)的組織學(xué)依據(jù)；通過分子生物學(xué)方法測定垂體腺瘤組織中NPY及其受體的基因表達(dá)，研究其表達(dá)水平與腫瘤內(nèi)分泌的關(guān)系；同時應(yīng)用原位雜交技術(shù)進(jìn)一步研究Y1R和Y2R在垂體腺瘤細(xì)胞水平的分布特征及生物學(xué)意義。結(jié)果(1)人垂體腺瘤中存在NPY及其受體(Y1R和Y2R)表達(dá)，而且在不同類型垂體

7、腺瘤中NPY及其Y2R表達(dá)存在顯著差異，在促性腺細(xì)胞腺瘤中的表達(dá)水平最高，而在泌乳素腺瘤中表達(dá)最低；垂體腺瘤中NPY與Y2R的表達(dá)呈正相關(guān)；生長激素腺瘤中NPY基因表達(dá)水平與血清GH濃度呈正相關(guān)。(2)免疫電鏡顯示NPY主要位于垂體腫瘤細(xì)胞的分泌顆粒中，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞基質(zhì)也有散在分布。(3)在侵襲和非侵襲性垂體腺瘤之間NPY及其受體(Y1R和Y2R)的表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)。(4)原位雜交研究顯示垂體腫瘤細(xì)胞和瘤內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞

8、中均存在Y1R和Y2R基因表達(dá)，而且腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中Y2R表達(dá)水平明顯高于Y1R。(5)卒中組垂體腺瘤中NPY及其Y2R表達(dá)水平明顯高于非卒中組腺瘤，而且Y2R的表達(dá)差異主要存在于腫瘤的血管內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)論(1)NPY及其受體(Y1R和Y2R)在垂體腺瘤中存在表達(dá)，而且表達(dá)水平與垂體腺瘤的生物學(xué)行為有關(guān)。(2)NPY及其受體(Y1R和Y2R)參與調(diào)節(jié)垂體腺瘤的內(nèi)分泌功能。(3)NPY可能通過Y2R調(diào)節(jié)垂體腺瘤的病理性血液循環(huán)。(4)NP