微管蛋白在骨腫瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、骨骼的原發(fā)性腫瘤相對少見，發(fā)生于骨的肉瘤僅占人類全部腫瘤的0.2％，但是它們的發(fā)病年齡特殊，尤其是骨肉瘤，主要發(fā)生在10-20歲的青少年，且致畸致殘率高，因此其發(fā)病機制、診斷和治療已引起廣泛關(guān)注。 根據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查和病理特征，骨腫瘤典型病例一般可以作出正確診斷。但對于不典型病例的鑒別診斷尚有諸多困難，如骨母細(xì)胞瘤需要與侵襲性骨母細(xì)胞瘤和骨母細(xì)胞型骨肉瘤相鑒別，增生活躍的軟骨瘤需要與高分化軟骨肉瘤鑒別．目前，免疫組化是臨床

2、病理最常用的鑒別診斷技術(shù)，對腫瘤的診斷有著不可替代的作用。骨腫瘤還沒有特異的免疫標(biāo)記，尋找準(zhǔn)確可靠的免疫組化標(biāo)記物對于臨床病理診斷工作來說有著十分重要的意義。而且，骨腫瘤的病因和發(fā)病機制尚未明了，還需要進一步探索。 在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，由中心體異常導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞極性改變和染色體的不穩(wěn)定性正成為近年的研究熱點。微管蛋白(tubulin)作為中心體的重要組成部分，參與染色體的運動、有絲分裂和細(xì)胞周期的調(diào)控。目前在真核生物中已確認(rèn)的

3、微管蛋白有7種[2]，其中α、β和γ微管蛋白主要參與了中心體的構(gòu)成，α和β微管蛋白首尾相連構(gòu)成中心粒的三連體微管，γ微管蛋白是中心粒周圍基質(zhì)(pericentriolar matrix，PCM)中比較有代表性的一種蛋白，對微管的形成和微管極性的確定有重要作用。研究表明許多疾病都與微管蛋白的變化有關(guān)，只要細(xì)胞DNA發(fā)生變化，細(xì)胞有絲分裂受到影響，都可表現(xiàn)出微管蛋白的改變，微管蛋白量的改變在一定程度上反應(yīng)了中心體量的改變。統(tǒng)計研究資料表明，

4、無論是成骨性肉瘤，還是成軟骨性肉瘤，均有染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的變異，稱為染色體的不穩(wěn)定性，導(dǎo)致非整倍體形成。已有文獻報道骨肉瘤中非整倍體的形成與γ微管蛋白增加和中心體擴增密切相關(guān)，但是骨腫瘤中其它微管蛋白的表達(dá)情況及其與骨腫瘤的發(fā)生發(fā)展、分化演進的關(guān)系尚未明確。 本研究采用免疫組織化學(xué)方法，對良、惡性成骨性和成軟骨性腫瘤中α、βⅡ、β微管蛋白的表達(dá)進行檢測，觀察分析其表達(dá)狀況。并采用蛋白印跡法(Western Blot)，對新鮮骨腫

5、瘤標(biāo)本進行定量分析，探討微管蛋白在骨腫瘤發(fā)病中的作用及其在臨床病理診斷中的意義。 材料與方法 收集1995年5月—2008年5月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院診斷明確的成骨性腫瘤151例，將病例分為4組，分別為纖維結(jié)構(gòu)不良26例、骨母細(xì)胞瘤26例、侵襲性骨母細(xì)胞瘤12例、骨肉瘤87例(骨母細(xì)胞型骨肉瘤64例，其它類型骨肉瘤23例)；軟骨性腫瘤128例，將病例分為3組，分別為軟骨瘤28例，軟骨母細(xì)胞瘤49例、軟骨肉瘤51例(高分化軟

6、骨肉瘤29例，中低分化軟骨肉瘤22例)，采用免疫組化染色方法檢測α、βⅡ、β微管蛋白和Ki67的表達(dá)。 提取7例新鮮骨腫瘤手術(shù)標(biāo)本(包括骨母細(xì)胞瘤1例，軟骨母細(xì)胞瘤1例，軟骨母細(xì)胞瘤伴骨母細(xì)胞瘤1例，普通型骨肉瘤4個亞型各1例)的蛋白質(zhì)，通過Western Blot技術(shù)對微管蛋白在骨腫瘤中的表達(dá)行定量分析。 實驗結(jié)果 1.α—微管蛋白在成骨性腫瘤均有表達(dá)，在良性和中間型病變中表達(dá)(+)，骨肉瘤表達(dá)(++)，4個樣

7、本組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (F=6.44，P=0.000)。纖維結(jié)構(gòu)不良、骨母細(xì)胞瘤和侵襲性骨母細(xì)胞瘤，組間無顯著差異(P>0.05)，骨肉瘤表達(dá)明顯增高，與其余三組比較，組間有顯著差異(P均<0.05)；骨母細(xì)胞瘤、侵襲性骨母細(xì)胞瘤和骨母細(xì)胞型骨肉瘤3個樣本組進行比較，骨母細(xì)胞型骨肉瘤α微管蛋白表達(dá)最高(++)，明顯高于其它兩組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=10.811，P=0.000)。 2.在成骨性腫瘤的4個樣本組中

8、，各組βⅡ—微管蛋白的表達(dá)均很低，4個樣本組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.044，P=0.375)，任意兩組間的差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；骨母細(xì)胞瘤、侵襲性骨母細(xì)胞瘤和骨母細(xì)胞型骨肉瘤3個樣本組間比較，組間無顯著差異(F=2.104，P=0.127)。 3.β—微管蛋白在纖維結(jié)構(gòu)不良和侵襲性骨母細(xì)胞瘤中呈陰性表達(dá)，在骨母細(xì)胞瘤和骨肉瘤中表達(dá)增強，4個樣本組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8.180，P=0.000)

9、，纖維結(jié)構(gòu)不良與骨母細(xì)胞瘤/骨肉瘤比較，侵襲性骨母細(xì)胞瘤與骨肉瘤比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，其余各組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；骨母細(xì)胞瘤、侵襲性骨母細(xì)胞瘤和骨母細(xì)胞型骨肉瘤三組進行比較，侵襲性骨母細(xì)胞瘤與骨母細(xì)胞型骨肉瘤組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 4.Ki67指數(shù)在纖維結(jié)構(gòu)不良、骨母細(xì)胞瘤、侵襲性骨母細(xì)胞瘤和骨肉瘤中的指數(shù)分別是0.73，1.50，3.38和16.39，前3組之間組間

10、無差異，第4組明顯增高，統(tǒng)計有顯著差異(P<0.05)。 5.在軟骨性腫瘤3個樣本組中，α—微管蛋白在軟骨瘤和軟骨肉瘤中表達(dá)(+)，軟骨母細(xì)胞瘤表達(dá)(++)，3個樣本組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=3.446，P=0.035)，軟骨瘤和軟骨母細(xì)胞瘤組間差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)． 6.在軟骨性腫瘤3個樣本組中，βⅡ—微管蛋白在軟骨瘤呈陰性表達(dá)，軟骨母細(xì)胞瘤和軟骨肉瘤中表達(dá)(+)，3個樣本組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

11、(F=8.493，P=0.000)，軟骨母細(xì)胞瘤與軟骨肉瘤之間無組間差異(P>0.05)，軟骨瘤與其它兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。 7.在軟骨性腫瘤3個樣本組中，β—微管蛋白在軟骨瘤表達(dá)呈陰性，軟骨母細(xì)胞瘤和軟骨肉瘤中表達(dá)(+)，3個樣本組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=23.212，P=0.000)，任意兩組組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。 8.軟骨瘤與高分化軟骨肉瘤比較，高分化軟骨肉瘤中βⅡ

12、、β—微管蛋白表達(dá)(+)，明顯高于軟骨瘤，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。中低分化軟骨肉瘤中β—微管蛋白表達(dá)(一)，明顯低于高分化軟骨肉瘤(+)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 9.Ki67指數(shù)在軟骨瘤、軟骨母細(xì)胞瘤和軟骨肉瘤中分別為0.11，0.88，14.5(高分化5.66，中低分化26.3)，前兩組之間無組間差異(P>0.05)，第3組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 10.在收集的7例新鮮手

13、術(shù)標(biāo)本中，骨母細(xì)胞型骨肉瘤和纖維母細(xì)胞型骨肉瘤可檢測到α和βⅡ—微管蛋白表達(dá)，其余病例均陰性；4例骨肉瘤均可檢測到β—微管蛋白表達(dá)，其余3例良性骨腫瘤陰性；γ—微管蛋白在3例骨肉瘤(除混合型骨肉瘤外)和1例軟骨母細(xì)胞瘤可檢測到，其余病例弱表達(dá)。 結(jié)論： 1、α、β、βⅡ—微管蛋白均高表達(dá)于骨肉瘤，提示可能通過影響中心體擴增參與了骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展過程，并在良性、中間性和惡性成骨性腫瘤的鑒別診斷方面起到一定的輔助作用。