視覺剝奪及氯化鉀刺激對大鼠視皮層神經(jīng)元核呼吸因子表達的影響.pdf

1、核呼吸因子(NRF)是一類轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，通過調(diào)節(jié)線粒體基因組(mtDNA)、核基因組(nDNA)編碼的呼吸鏈亞基以及線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(mtTFA)參與神經(jīng)原的能量代謝。以往研究證實，神經(jīng)元興奮性調(diào)節(jié)NRFs的表達，但目前對于這種興奮依賴性調(diào)節(jié)的時間模式及調(diào)節(jié)機制未見報道。本實驗建立了SD乳大鼠大腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)體系，在此基礎(chǔ)上，初步研究了KCI引起的核呼吸因子及相關(guān)上下游基因的興奮依賴性表達變化的時間模式；并通過SD大鼠視覺剝奪動物

2、模型，觀察了視覺剝奪對大鼠視皮層核呼吸因子表達及線粒體功能的影響。
　　實驗采用原代培養(yǎng)的乳大鼠大腦視皮層神經(jīng)元，施加興奮性刺激(KCI)，于刺激后1h、3h、5h、7h和10h收集細胞，進行RT-PCR檢測，觀察了神經(jīng)元內(nèi)PGC-1、NRFs以及mtTFA基因表達的一系列變化。同時為了驗證體外實驗結(jié)果，我們構(gòu)建了大鼠視覺發(fā)育關(guān)鍵期視覺剝奪模型以降低大鼠視皮層神經(jīng)元的興奮性，并于視覺剝奪后6w，檢測其視皮層內(nèi)NRF-1、NRF-2

3、α、NRF-2β的表達水平，并檢測視皮層ATP濃度以觀測線粒體功能。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NRFs基因的表達在KCl刺激后各不相同，NRF-1于刺激后3h達高峰，之后表達降低，7h時再次升高達峰值之后出現(xiàn)下降，呈雙峰形態(tài)；NRF-2α于刺激后持續(xù)升高至3h達高峰，經(jīng)歷5h的降低后，再次升高并維持在這一水平；NRF-2β則在7h達到峰值，其余時間點雖有顯著升高且表達水平相近，但均低于7h。視覺發(fā)育關(guān)鍵期內(nèi)，進行了視覺剝奪的大鼠，視皮層內(nèi)N