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文檔簡介
1、蠟梅(Chimonanthus praecox L.)為我國傳統(tǒng)名花,是蠟梅科蠟梅屬落葉叢生灌木?;ㄏ沭ビ簦_于百花寂寥的冬季,香氣特征作為重要性狀,在切花、園林種植中廣泛應(yīng)用。
本文以芳香的H29和無香的SW001品系蠟梅作為研究材料,測定4個時期揮發(fā)物成分。篩選轉(zhuǎn)錄組庫萜類差異表達基因CpTPS5、Cp TPS16,通過實時定量表達分析,結(jié)合揮發(fā)物種類及釋放量差異,尋找基因表達與花香釋放之間的聯(lián)系。構(gòu)建雙元表達載體,在煙草
2、中超量表達CpTPS5、Cp TPS16,利用GC-MS對香氣成分定性及定量分析,初步探究萜烯合成酶功能。
1、H29和SW001蠟梅品系共鑒定出64種香氣成分,萜類、苯環(huán)型化合物占據(jù)主導地位。H29盛花期單位時間內(nèi)揮發(fā)物質(zhì)總量為3449.48ng/g,含量較高的物質(zhì)分別為:芳樟醇、乙酸芐酯、水楊酸甲酯。SW001同期揮發(fā)物總量為9886.26ng/g,含量較高的物質(zhì)分別為:反式-β羅勒烯、(1S,2S,3R,5S)-(+)-
3、2,3-蒎烷二醇、2,6-二甲基-1,3,5,7-辛四烯、甜樺油、苯甲酸甲酯。
2、對2品系4個時期花香成分測定,H29萜類總含量露瓣期至末花期,逐漸增加。單萜含量變化一致;倍半萜最高含量86.57ng/g出現(xiàn)于露瓣期,隨后降低,末花期有所回升。SW001萜類總含量變化趨勢呈先增后減,單萜揮發(fā)物釋放與之一致;倍半萜揮發(fā)物含量露瓣期高于初開期,于盛花期達到頂峰,為44.46ng/g,末花期降低。
3、經(jīng)蛋白序列比對,C
4、pTPS5、Cp TPS16在H29和SW0012品系中無差異;構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,CpTPS5與TPSa倍半萜合酶家族聚類到一起,與石竹烯較為相近;CpTPS16同TPSb單萜合酶萜家族聚類到一起。
4、實時定量PCR結(jié)果顯示:CpTPS5基因在H29中上調(diào)表達,表達先增加后減少,盛花期表達量是同期SW001品系13倍;CpTPS16基因在SW001中上調(diào)表達,在4時期中顯著高于基因在H29品系表達量。2品系中表達趨勢相同,由露
5、瓣期至末花期持續(xù)增加。
5、煙草中超量表達CpTPS5、CpTPS16,由揮發(fā)物成分測定及定量計算分析可得:萜類成分中單萜、倍半萜物質(zhì)釋放量呈現(xiàn)規(guī)律性,轉(zhuǎn)基因植株與野生型揮發(fā)物種類無顯著差異,但揮發(fā)性萜類遠超于野生型中萜類釋放量。絕對定量計算石竹烯、芳樟醇、檸檬烯、萘①、己酸甲酯5種揮發(fā)性物質(zhì),發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)CpTPS16基因中上述萜類物質(zhì)釋放量約為CpTPS5中2倍,且顯著高于其在野生型、空載中的釋放量,而鏈狀酯類己酸甲酯在CpT
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