n-3HUFA對西伯利亞鱘親魚繁殖力及子代發(fā)育和脂肪代謝的影響.pdf

1、西伯利亞鱘(Acipenser baeri Brandt)屬鱘形目(Acipenseriforme)，鱘科，是一類古老的軟骨硬鱗魚類，在魚類進化史上占有重要地位，有活化石之稱。同時也是我國重要的經濟魚類養(yǎng)殖品種，產量居世界之首。本研究分別以西伯利亞鱘親魚及仔稚魚作為試驗對象，研究飼料中n-3HUFA水平對親魚繁殖性能、脂肪代謝、仔稚魚質量的影響以及飼料中不同DHA/EPA比例對仔魚早期生長發(fā)育、脂肪代謝及抗氧化能力的影響，并探索通過開口

2、期營養(yǎng)規(guī)劃來改善其對低n-3HUFA飼料的利用能力的可能性。本研究內容共分為以下四個部分，分別摘要如下:
　　試驗一:西伯利亞鱘PPARα、LPL和HL基因全長cDNA克隆與序列分析
　　本試驗通過反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和cDNA末端快速擴增(RACE)技術克隆西伯利亞鱘（Acipenser bαerii）肝臟中過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)、脂蛋白酯酶(LPL)、肝酯酶(HL）基因全長cDNA序列

3、。結果顯示:西伯利亞鱘肝臟中PPARα基因(GenBank登錄號KJ534588) cDNA全長1736 bp，包括158 bp的5'非翻譯區(qū)、1401 bp的開放閱讀框及177 bp的3'非翻譯區(qū);開放閱讀框編碼1個由466個氨基酸組成的蛋白質，預測其分子質量為52.3 ku，與其他物種的相似性為75.5％～82.4％; LPL基因（GenBank登錄號KJ720972）cDNA全長1760 bp，包括163 bp的5'非翻譯區(qū)、15

4、06 bp的開放閱讀框及91bp的3'非翻譯區(qū);開放閱讀框編碼1個由501個氨基酸組成的蛋白質，預測分子質量為57.1ku，與其他物種的相似性為48.7％～67.0％;HL基因（GenBank登錄號KJ720973）cDNA全長1740 bp，包括124bp的5'非翻譯區(qū)、1500 bp的開放閱讀框及116 bp的3'非翻譯區(qū);開放閱讀框編碼1個由499個氨基酸組成的蛋白質，預測分子質量為56.4 ku，與其他物種的相似性為55.4％～

5、67.1％。通過構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹發(fā)現(xiàn)，西伯利亞鱘PPARα與高等脊椎動物的親緣關系較近，LPL、HL與魚類親緣較近。本試驗通過對西伯利亞鱘PPARα、HL、LPL基因同源性、系統(tǒng)進化地位的分析，為進一步研究西伯利亞鱘脂肪代謝調控機制奠定了分子生物學基礎。
　　試驗二:n-3HUFA對西伯利亞鱘親魚繁殖力及其子代生長發(fā)育的影響
　　本試驗設計兩種等氮等能的膨化沉性飼料，n-3HUFA的含量分別為2.95％和1.79％，分別命

6、名為H組和L組。分別飼喂雌雄兩種性別的西伯利亞鱘親本，試驗周期11個月。在繁殖期間，記錄親本繁殖性能指標，并分別取不同親本來源的仔稚魚統(tǒng)計開口期存活率;仔稚魚根據(jù)親本來源分為D1（H♀×H♂）、D2（H♀×L♂）、D3（L♀×H♂）、D4（L♀×L♂）4個處理組，每個處理組3個重復，并記錄仔稚魚期間生長、存活狀況。試驗結果表明:H組雌性親本的相對懷卵率、卵重均高于L組，但未達到顯著水平(P＞0.05);H組魚卵中n-3HUFA含量顯著高

7、于L組并且H組卵徑顯著高于L組(P＜0.05);H組中雄性親本精子平均曲線運動速度(VCL)、平均直線運動速度(VSL)均顯著高于L組(P＜0.05)，精子活率高于L組但未達到顯著水平，精液密度、平均路徑運動速度(VAp)、精子平均側擺幅值(ALH)、精子平均打鞭頻率(BCF)、精子平均移動角度(MAD)均無顯著性差異(P＞0.05)。H組親魚血清中TC的含量H組與L組差異不顯著(P＞0.05)，TG含量顯著低于L組(P＜0.05)，血

8、清中HDL水平與L組差異不顯著(P＞0.05)，LDL顯著低于L組(P＜0.05)。血清中MDA的濃度試驗組顯著低于L組(P＜0.05)，SOD和T-AOC顯著高于L組(P＜0.05)。仔稚魚D1組和D2組7日齡存活率、30日齡存活率均顯著高于D3組和D4組(P＜0.05); D4組的特定生長率以及終末均重在各組中最低，且顯著低于D2組(P＜0.05)，其他各組之間差異并不顯著(P＞0.05)。以上試驗結果說明:n-3HUFA可以顯著影

9、響西伯利亞鱘雙親的繁殖性能及其仔稚魚的存活。同時，對西伯利亞鱘親魚脂肪代謝存在積極作用并可以顯著提高其抗氧化能力。
　　試驗三:微顆粒飼料中DHA/EPA對西伯利亞鱘仔稚魚生長、脂肪代謝及抗氧化性能的影響
　　本試驗的主要目的是研究飼料DHA/EPA對西伯利亞鱘仔稚魚生長、脂肪代謝及抗氧化性能的影響。將西伯利亞鱘仔魚以800尾/桶的密度隨機投放于12個循環(huán)水養(yǎng)殖桶中，隨機分成4個處理組，每個處理組3個重復，不同處理分別投喂D

10、HA/EPA比例為1.33∶1（R1.33組）、1.86∶1(R1.86組)、2.25∶1（R2.25組）、2.75∶1（R2.75組）的4種等氮等能的微顆粒飼料，實驗周期為32d。試驗結果表明:R2.75組西伯利亞鱘仔稚魚體長、終末均重、凈增重、特定生長率均顯著高于其他三組（P＜0.05）;臟體比、肥滿度及存活率各組之間沒有顯著性差異;R2.25組和R2.75組稚魚全魚CAT活性顯著高于R1.33組和R1.86組。SOD、T-AOC和

11、MDA各組之間沒有顯著性差異(P＞0.05)。TCH、TG、HDL、LDL各組之間均沒有顯著性差異(P＞0.05)。內臟團PPARα、LPL的表達量各組之間差異不顯著，但R2.25組和R2.75組中HL的表達量顯著高于R1.33組(P＜0.05)。以上結果表明:飼料中DHA/EPA為2.75時，西伯利亞鱘仔魚的生長效果最佳;飼料中DHA/EPA比例可以顯著改善西伯利亞鱘鱘仔稚魚魚體中脂肪酸組成，并對其抗氧化能力的提升有一定的影響，但是對

12、西伯利亞鱘仔稚魚早期脂肪代謝影響并不顯著。
　　試驗四:早期低n-3HUFA刺激對西伯利亞鱘仔稚魚生長、脂肪代謝及抗氧化的影響
　　本試驗基于早期營養(yǎng)規(guī)劃理論，探索早期低n-3HUFA刺激對西伯利亞鱘仔魚生長及后期抗氧化、脂肪代謝的影響。試驗分成兩組，H組飼喂n-3HUFA水平為2.32％的微顆粒飼料，L組飼喂n-3HUFA為n-3HUFA水平為0.54％的微顆粒飼料，兩組飼喂至仔魚32日齡后，分別采用n-3HUFA水平為2

13、.02％和0.27％的飼料飼喂33-55日齡和56-77日齡階段。試驗結果表明:L組在32日齡的末均重及特定生長率均顯著低于飼喂高HUFA的H組(P＜0.05)，存活率兩組之間并無顯著性差異(P＞0.05)。然而在對兩組仔魚飼喂同一種n-3HUFA含量適宜的飼料后(33～55日齡)，L組的特定生長率和增重率均高于了H組，但末均重還是顯著低于H組。在飼喂低n-3HUFA飼料后（56-77日齡），L組的增重率和特定生生長率與H組無顯著差異，

14、H組末均重顯著高于L組(P＜0.05)。32、77日齡仔魚內臟團組織勻漿液中抗氧化指標兩組之間均無差異顯著性(P＞0.05)。77日齡魚體脂肪酸組成中L組DHA、EPA及n-3HUFA總量均顯著低于H組(P＜0.05)。18日齡，H組仔魚內臟團中PPARα、HL、LPL基因表達量均顯著高于L組;32日齡，H組仔魚內臟團中LPL基因表達量均顯著高于L組，PPARα、HL表達量兩組之間差異不顯著;77日齡，PPARα、HL、LPL在肝臟中的