對苯二甲酸致膀胱損傷作用的研究.pdf

1、該研究在TPA 90天亞慢性大鼠染毒實驗的基礎上,觀察并探討了TPA、膀胱結石和膀胱上皮的增生三者間的因果關系,以期為闡明TPA致膀胱損傷作用的機制,確立其對人群危害作用提供科學依據(jù).第一部分 對苯二甲酸對膀胱損傷作用的機制研究 目的:該研究觀察并探討了TPA對90天亞慢性染毒大鼠膀胱的損傷作用及其機制,以期為合理評價TPA的危害性提供線索.方法:SD大鼠隨機分為5組,飼以含0％、0.04%、O.2%、1%和5%TPA的飼料,連續(xù)飼喂9

2、0天,收集血、尿和膀胱等組織與器官作進一步分析與研究.第二部分 對苯二甲酸結石致大鼠膀胱上皮細胞增殖效應的機制 目的:膀胱癌是泌尿外科常見的惡性腫瘤之一,由于復發(fā)率較高,死亡率逐年上升.腫瘤的發(fā)生與細胞周期調控通路密切相關,TPA致大鼠膀胱結石模型為研究慢性損傷致膀胱上皮增生及細胞增殖效應提供了工具.方法:剛斷乳SD大鼠隨機分為6組,分別飼以正常及含5%TPA,5%TPA+4%NaHCO<,3>,4%NaHCO<,3>,5%TPA+0.

3、02%氫氯噻嗪和0.02%氫氯噻嗪的飼料.90天后收集膀胱標本進行病理學分析,以及p16<'Ink4a>,cyclinD<,1>,CDK4,EGFr,cyclin E和相關增殖細胞核抗原(PCNA)免疫組織化學檢測.第三部分 對苯二甲酸代謝研究 目的:探討機體能否代謝TPA,TPA及其可能代謝產(chǎn)物的DNA損傷作用,以及TPA染毒后與膀胱癌相關代謝酶的改變,為TPA的非結石致膀胱損傷作用尋找直接和間接的證據(jù).方法:采用S.typhimur

4、ium NM2009測試菌株檢測TPA分別與苯巴比妥鈉、3-甲基膽蒽及禁食誘導和非誘導肝微粒體共孵育后的誘變活性;HPLC測定肝微粒體體外孵育系統(tǒng)中,不同溫孵條件下TPA量的變化;RT-PCR法觀察比較TPA 90天染毒大鼠膀胱癌相關代謝酶CYP4B1在肝、腎和膀胱組織中的表達.第四部分 對苯二甲酸染毒大鼠膀胱抑癌基因P16的分析 目的:探討TPA染毒大鼠膀胱組織中抑癌基因p16與膀胱損傷性增生的關系,為闡明TPA致膀胱損傷的分子機制提

5、供線索.方法:免疫組織化學法觀察TPA染毒大鼠膀胱組織p16蛋白的表達;RT-PCR觀察p16 mRNA的改變;基因組DNA PCR分析p16基因有無缺失;限制性內(nèi)切酶Hpa Ⅱ/Msp Ⅰ酶切法檢測p16基因的甲基化.第五部分 對苯二甲酸染毒對機體脂質代謝的影響 目的:研究TPA90天染毒后,大鼠血漿蛋白、血脂及體內(nèi)氧化應激防御體系的變化,為評價其毒作用機制提供依據(jù).方法:SD大鼠按TPA染毒劑量依次分為0%0.04%,0.2%,1%