荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清體外抗流感病毒效應(yīng)及TLR-IFN機(jī)制研究.pdf

1、目的：采用血清藥理實驗方法，研究荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清體外對甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/PR/8/34（H1N1）增殖的影響，并探討其抗病毒效應(yīng)的TLR/IFN信號機(jī)制，為解表藥“辛散解表”性效與應(yīng)用提供科學(xué)實驗依據(jù)。
　　方法：（1）含藥血清體外抗甲型流感病毒作用研究：①細(xì)胞病變法（CPE）檢測荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清對狗腎傳代細(xì)胞（MDCK）的最大無毒濃度(TC0)。②血凝實驗測定甲型流感病毒對MDCK細(xì)胞的感染性。③制備不同

2、取血時間點的荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清，通過 CPE法和血凝實驗對不同取血時間點的含藥血清進(jìn)行藥效學(xué)比較，篩選獲得制備含藥血清的最佳取血時間點。④血凝實驗和四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法觀察荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清對甲型流感病毒細(xì)胞內(nèi)增殖的抑制作用及對甲型流感病毒的直接殺滅作用，同時探討含藥血清對病毒增殖影響的最佳給藥時間。（2）含藥血清抗甲型流感病毒作用機(jī)制研究：①ELISA法測定流感病毒感染細(xì)胞IFN-β的分泌水平。②采用RT-PCR

3、法測定荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清對流感病毒感染細(xì)胞 TLR7、IFN-β、TRAF6、MyD88 mRNA表達(dá)量的影響。③Western Blot法觀察含藥血清對流感病毒感染細(xì)胞TRAF6蛋白表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　?、偾G芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清對 MDCK細(xì)胞的TC0均為5％，即在相應(yīng)培養(yǎng)基中含藥血清含量為5%。
　　②甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株 A/PR/8/34(H1N1)對MDCK細(xì)胞的病毒半數(shù)組織感染量（TC

4、ID50）為10-3.5/0.1ml。
　?、蹖Σ煌⊙獣r間點制備的含藥血清進(jìn)行藥效學(xué)比較，確定制備荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清的時間點為連續(xù)灌胃給藥5d（每日1次），末次給藥后1h進(jìn)行。
　　④荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清5%、3.5%、2.5%濃度對10TCID50甲型流感病毒的增殖均有顯著抑制作用，且5%、3.5%濃度的荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清對甲型流感病毒具有直接殺滅作用。⑤與病毒對照組比較，荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清在5%濃

5、度時顯著升高流感病毒感染MDCK細(xì)胞上清液中IFN-β含量（P<0.01或P<0.05），并顯著提高流感病毒感染MDCK細(xì)胞TLR7、IFN-βmRNA表達(dá)量（P<0.01），顯著抑制TRAF6、MyD88 mRNA表達(dá)水平（P<0.01），能明顯減少TRAF6蛋白表達(dá)量（P<0.01）。
　　結(jié)論：荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清對甲型流感病毒在MDCK細(xì)胞中的增殖具有明顯抑制作用，并具有一定直接殺滅作用，結(jié)果與兩種揮發(fā)油的體外、體內(nèi)實