鱉甲中寡肽類化學(xué)成分及炮制原理的研究.pdf

1、中藥炮制是我國(guó)的一項(xiàng)傳統(tǒng)制藥技術(shù)，也是我國(guó)醫(yī)藥學(xué)特有的制藥術(shù)語(yǔ)，歷史悠久，內(nèi)容豐富，體現(xiàn)了樸素辯證法思想，對(duì)中藥學(xué)的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)，是中醫(yī)藥的特色之一。 為此，“十五”期間，中藥鱉甲等50種中藥飲片的炮制，被列為國(guó)家重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目，以期通過(guò)系統(tǒng)研究，利用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論和科技手段對(duì)中藥炮制理論和方法進(jìn)行去粗取精、去偽存真，達(dá)到改革完善中藥炮制方法之目的。 本文對(duì)鱉甲化學(xué)成分、炮制工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，開(kāi)展了以下研究工作：一、文獻(xiàn)

2、綜述綜合評(píng)價(jià)分析了鱉甲在炮制學(xué)、化學(xué)成分、藥理學(xué)、臨床應(yīng)用等相關(guān)領(lǐng)域的研究文獻(xiàn)，為制定切實(shí)可行的研究方案、確定研究考察指標(biāo)及研究工作起點(diǎn)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，共引用文獻(xiàn)21篇。 對(duì)肽類化合物的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及其藥理活性進(jìn)行了綜述，并對(duì)從中藥中提取分離肽類化合物進(jìn)行了總結(jié)，共引用文獻(xiàn)94篇。 二、實(shí)驗(yàn)研究1.現(xiàn)代文獻(xiàn)研究認(rèn)為，氨基酸為鱉甲中的主要有效成分。但是經(jīng)過(guò)試驗(yàn)研究，我們發(fā)現(xiàn)鱉甲中的主要成分為寡肽類化合物。文獻(xiàn)報(bào)道，

3、某些寡肽類化合物具有抗疲勞及免疫調(diào)節(jié)等藥理活性，這與鱉甲的藥理活性相吻合。 2.對(duì)從中藥鱉甲中分離、純化寡肽進(jìn)行了一系列的研究，嘗試了應(yīng)用水提醇沉法、沉淀法、各種柱層析(包括硅膠、凝膠、大孔吸附樹(shù)脂、反相硅膠等)分離方法進(jìn)行分離，初步確定了一些分離、純化寡肽的方法。并且應(yīng)用于中藥鱉甲的寡肽類化學(xué)成分的研究。 3.對(duì)醋鱉甲的化學(xué)成分進(jìn)行研究，為合理解釋鱉甲的傳統(tǒng)功效提供依據(jù)。(1)對(duì)醋鱉甲提取工藝進(jìn)行考察。以出膏率、游離總

4、氨基酸的含量為指標(biāo)，對(duì)提取方法，提取溶劑，提取時(shí)間等因素進(jìn)行優(yōu)選，最終確定藥材加10倍量水，回流提取三次，每次兩小時(shí)為最佳工藝。(2)采用兩種不同方法對(duì)鱉甲中的寡肽類化合物進(jìn)行分離、純化。方法一：先用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行粗分，然后經(jīng)HPLC進(jìn)行純化，得到5個(gè)寡肽類化合物。方法二：對(duì)醋鱉甲進(jìn)行水提醇沉，分為80％醇沉淀部分和95％醇溶解部分。將兩部分分別上柱，共分離得到4個(gè)單體化合物。其中80％醇沉淀部位1個(gè)，95％乙醇溶解部分3個(gè)。運(yùn)用化學(xué)

5、方法、譜學(xué)方法和氨基酸測(cè)序方法鑒定了其中的1個(gè)化合物為AAHGPCG，該化合物為首次從自然界分離得到的。 4.對(duì)鱉甲炮制工藝進(jìn)行研究，探討炮制原理。以出膏率、游離總氨基酸的含量為指標(biāo)，通過(guò)試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)鱉甲的凈制工藝和砂燙醋淬工藝進(jìn)行研究，確定藥材常壓下蒸75min后砂燙250℃20min，6％醋精淬，無(wú)論從性狀還是從浸出物、氨基酸和總肽的含量上來(lái)說(shuō)，都是相對(duì)比較理想和切實(shí)可行的方法。通過(guò)炮制前后對(duì)比，探討了炮制原理。 5.

6、建立鱉甲中游離總氨基酸的含量測(cè)定方法。結(jié)果游離總氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0099x-0.2607，r=0.9951(n=5)，表明y在40～140μg/ml范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系，加樣回收率為101.67％，RSD為2.82％。 6.建立鱉甲中總肽類化學(xué)成分的含量測(cè)定方法。以七肽為對(duì)照品，結(jié)果七肽的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0423x，r=0.9997(n=5)，表明y在2.5～10.04mg范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系，加