黃河中上游半干旱區(qū)典型鹽漬土中微生物活性物質(zhì)及拮抗性放線菌資源研究.pdf

1、本研究以黃河中上游半干旱區(qū)典型鹽漬土這種特殊生態(tài)環(huán)境中分離出的細(xì)菌和放線菌為供試菌株，采用平板篩選法對(duì)細(xì)菌產(chǎn)淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、纖維素酶的能力進(jìn)行初步研究；采用經(jīng)典分類方法對(duì)供試放線菌進(jìn)行了初步的分類鑒定，獲得供試放線菌的類群組成，并以作物栽培和動(dòng)物養(yǎng)殖中危害較大的幾種病原菌為靶標(biāo)菌，采用固體和液體兩種篩選方法，對(duì)放線菌拮抗性進(jìn)行研究，從中篩選出對(duì)病原菌有較好拮抗作用或優(yōu)良的抑菌物質(zhì)產(chǎn)生菌；對(duì)篩選出的3株優(yōu)良拮抗放線菌進(jìn)行分類鑒定；

2、通過生物試驗(yàn)篩選出一株優(yōu)良的拮抗菌株，并對(duì)其產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)的最佳培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究。得到如下結(jié)論： 1.供試放線菌中以鏈霉菌屬為主占到90.73％。鏈霉菌屬中以球孢類群，粉紅孢類群，灰褐類群，黃色類群為主，占到放線菌總數(shù)的55.62％。 2.供試的706株放線菌中有拮抗活性的占到76.44％，但廣譜性拮抗菌較少；拮抗性放線菌以粉紅孢類群、灰褐類群和球孢類群為優(yōu)勢(shì)類群。對(duì)動(dòng)物病原菌拮抗能力普遍比對(duì)植物病原菌強(qiáng)；通

3、過初篩和復(fù)篩試驗(yàn)得到3株優(yōu)良的廣譜拮抗放線菌02D01、43A04和13H06。 3.供試細(xì)菌能產(chǎn)生纖維素酶和蛋白酶的菌株都達(dá)到50％以上，且產(chǎn)酶能力較強(qiáng)的菌株所占比例也較大；而淀粉酶和脂肪酶的產(chǎn)生能力較弱，其中脂肪酶的產(chǎn)生能力最弱。產(chǎn)酶能力較好的菌株均為革蘭氏陽性菌。 4.通過經(jīng)典的形態(tài)、培養(yǎng)特征觀察，生理生化、生態(tài)條件試驗(yàn)以及胞壁組分、分子生物學(xué)鑒定，最后確定菌株02D01、13H06和43A04為鏈霉菌(Strep

4、tomyces)。其中02D01和43A04是同一種，為戈壁三素鏈霉菌(Streptomycesgobitricini)；菌株13H06與Streptomycessparsus親緣關(guān)系最近，序列相似數(shù)為99.69％。 5.通過生物試驗(yàn)確定出一株發(fā)酵液對(duì)于引發(fā)魚細(xì)菌性腸炎的腸型點(diǎn)狀氣單胞菌有良好抑制作用的菌株02D01。用藥量在2mg/kg·d就能達(dá)到很好的治療效果，其發(fā)酵液對(duì)生物無急性毒性，具有較好的溫度和酸穩(wěn)定性。 6

5、.液體發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，02D01菌株在種齡為48h，發(fā)酵時(shí)間120h發(fā)酵液的抑菌活性為最大。通過二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)，獲得產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)的最佳培養(yǎng)基配方為，可溶性淀粉2％，魚粉2％，NaCl2％，K2HPO40.05％，MgSO4.7H200.05％，CaCO30.1％。均勻設(shè)計(jì)對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果顯示，02D01菌株接種在優(yōu)化的培養(yǎng)基中，接種量5％，25℃，裝液量50mL/250mL，初始pH9時(shí)發(fā)酵液效價(jià)可達(dá)到34197.94