高脂飼料誘導(dǎo)的肥胖鼠腸道內(nèi)硫酸鹽還原菌的定量檢測與分離鑒定.pdf

1、肥胖是指體內(nèi)脂肪積累至可能對健康造成不良影響的程度，造成期望壽命下降和/或健康問題。超重和肥胖是全球第六大健康隱患，會增加人體患多種疾病的概率，如2型糖尿病、心血管疾病和結(jié)腸癌。世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，截止2008年，全球已有超過14億成年人體重超標，其中超過5億為肥胖；WHO預(yù)計到2015年，超重成年人數(shù)目將上升為23億，其中7億為肥胖。
　　大量研究表明，腸道菌群的結(jié)構(gòu)改變與肥胖關(guān)系密切。硫酸鹽還原菌（Sulfate-re

2、ducing Bacteria，SRB）是人及動物腸道菌群的成員之一，它是以有機化合物或無機化合物為電子供體，還原硫酸鹽產(chǎn)生硫化物的厭氧微生物。硫化氫是一種細胞毒化合物，可以通過抑制丁酸鹽氧化導(dǎo)致結(jié)腸上皮細胞受損甚至死亡，引起炎癥反應(yīng)。同時，革蘭氏陰性SRB細胞壁上的脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）是肥胖的誘因之一。因此，研究腸道內(nèi)SRB與肥胖的關(guān)系具有重要意義。
　　本研究首先采用熒光定量PCR的方法，選

3、擇ap rA基因作為S R B的分子標記，對高脂飼料誘導(dǎo)的肥胖實驗鼠腸道內(nèi)SR B的數(shù)量進行測定，以驗證SRB與肥胖之間的相關(guān)性。20只Wistar大鼠平均分為2組，分別飼喂高脂飼料和正常飼料，0、8、18周時采集糞樣和體重（數(shù)據(jù)）；24只C57BL/6J小鼠同樣平均分為2組，分別飼喂高脂飼料和正常飼料，0、6、16周時采集糞樣和體重（數(shù)據(jù)）。對所有糞樣內(nèi)的SRB進行定量檢測，并統(tǒng)計體重和定量結(jié)果，發(fā)現(xiàn)高脂飼料組的大鼠和小鼠的體重顯著高

4、于各自正常飼料組，同時高脂飼料組大鼠和小鼠腸道內(nèi)SR B的數(shù)量也顯著高于各自正常飼料組。大鼠實驗和小鼠實驗的結(jié)果均證實了SRB與肥胖相關(guān)。
　　為了深入研究腸道中SRB的功能以及與肥胖發(fā)生的關(guān)系，本論文對小鼠腸道中的SR B進行了分離和鑒定。從正常飼料和高脂飼料飼喂的C57BL/6J小鼠腸道內(nèi)共分離得到149株SRB菌株，并使用基于16S rRNA基因序列的核糖體DNA PCR擴增產(chǎn)物限制性內(nèi)切酶酶切分析技術(shù)（ARDRA）和基于全

5、基因組序列的腸桿菌基因間保守重復(fù)序列（ERIC序列）PCR指紋圖譜技術(shù)對分離物進行多樣性分析后發(fā)現(xiàn)：149株分離物的ARDRA類型單一，但可分為7個ERIC型；經(jīng)ERIC型代表菌株的16S rRNA基因測序和ARB軟件進化地位分析，7個代表菌株的最近鄰居雖不同但均屬脫硫弧菌屬。SRB純菌株的獲得為進一步研究SRB的生理生化特性和功能提供了菌種支持。
　　為驗證SRB是否具有導(dǎo)致實驗動物肥胖的作用，需進行SR B的動物回接實驗。為將

6、外源SRB與動物腸道內(nèi)的原住SRB進行區(qū)分以及活菌回收，選擇來自肥胖小鼠腸道的SRB分離物中生長速度最快的菌株 FB8，進行利福平抗性篩選，最終成功獲得抗性菌株3株。FB8利福平抗性菌株的獲得，為SRB的動物回接實驗奠定了基礎(chǔ)。
　　綜上所述，為研究SRB與肥胖之間的關(guān)系，本研究首先采用定量PCR的方法檢測肥胖大鼠和肥胖小鼠腸道內(nèi)SR B的數(shù)量變化，證實了肥胖實驗鼠腸道內(nèi)SRB的數(shù)量顯著上升，說明SRB與肥胖之間有相關(guān)性。然后為獲