STAT3在急性肝衰竭大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植后的表達變化.pdf

1、研究背景和目的：急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)是由多種病因引起的，肝細胞大量壞死而出現(xiàn)的嚴重肝功能障礙，可2周內(nèi)進展至肝性腦病，病情兇險、進展快、病死率高，其治療仍是世界性難題，目前原位肝移植是急性肝衰竭最有效的治療方法，但由于存在供肝的相對短缺、移植后的免疫排斥等問題，其臨床應(yīng)用明顯受限。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC)是骨髓的基質(zhì)干細胞

2、，一種非造血干細胞，既有支持造血、自我復(fù)制和高度增殖的能力，又有多向分化潛能，其來源方便廣泛，近年來臨床運用骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療急慢性肝病取得了良好療效，為臨床解決了肝臟移植、肝細胞移植、生物人工肝等肝源短缺問題。本研究采用D-氨基半乳糖建立急性肝功能衰竭大鼠模型，并經(jīng)尾靜脈注射移植骨髓間充質(zhì)干細胞，觀察骨髓間充質(zhì)干細胞移植對急性肝功能衰竭大鼠的保護作用，及其在此過程中對大鼠肝臟信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄活化子3(STAT3)、磷酸化-STA

3、T3(P-STAT3)表達的影響。
　　方法：
　　1.用頸椎脫臼法處死SD大鼠，無菌條件下取雙側(cè)股骨和脛骨，沖洗骨髓腔得到骨髓，采用全骨髓貼壁法分離、純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，并培養(yǎng)傳代至第3、4代供后續(xù)實驗使用。
　　2.106只健康雄性SD大鼠隨機分為正常組6只，急性肝功能衰竭組（對照組）50只、大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植組（移植組）50只。對照組、移植組經(jīng)腹腔注射D-氨基半乳糖建立大鼠急性肝衰竭模型，移植組于造模

4、后24h采用尾靜脈注射移植骨髓間充質(zhì)干細胞，對照組于造模后24h經(jīng)尾靜脈注射等量生理鹽水，每組留10只觀察生存率。
　　3.分別于移植前和移植后的1d、2d、3d、5d、7d6個時間點隨機取對照組、移植組大鼠各6只，用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，留取大鼠血清標本、肝臟組織標本。
　　4.采用全自動生物化學(xué)分析儀檢測各組大鼠的肝功能指標，常規(guī)蘇木素-伊紅染色觀察大鼠的肝組織病理學(xué)變化，半定量RT-PCR檢測肝組織內(nèi)STAT3m

5、RNA的表達，Western印跡法檢測肝組織內(nèi)STAT3、p-STAT3蛋白的表達。
　　5.應(yīng)用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.采用全骨髓貼壁法分離、純化、培養(yǎng)的第4代細胞經(jīng)流式細胞術(shù)鑒定，CD45-CD90+CD29+細胞占總細胞的比例＞90％，可鑒定為骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　2.與正常組相比，移植組、對照組大鼠各時間點血清中ALT、AST、Tbil水平明顯升高，均p＜0.05，差異

6、有統(tǒng)計學(xué)意義;與對照組相比，移植組大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植后各時間點（除1d）血清ALT、AST、Tbil水平降低，均p＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.與正常組相比，移植組、對照組大鼠肝組織切片可見肝細胞大量壞死，殘存肝細胞腫脹變性，伴炎性細胞浸潤;但移植組與對照組相比，兩組大鼠的肝組織病理學(xué)并無明顯變化。
　　4.與正常組相比，移植組、對照組大鼠各時間點肝組織內(nèi)STAT3mRNA的表達增加，均p＜0.05，差異有統(tǒng)

7、計學(xué)意義;但移植組與對照組各時間點相比，肝組織內(nèi)STAT3mRNA的表達并無明顯變化，p＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.與正常組相比，移植組、對照組大鼠各時間點肝組織內(nèi)STAT3蛋白的表達增加，均p＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與對照組相比，移植組大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植后的5d、7d肝組織內(nèi)STAT3蛋白的表達增加，p＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其余各時間點相比均p＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　6.與正常組