LASIK術中瞬時高眼壓對視網膜NO-NOS及凋亡基因的影響.pdf

1、目的研究LASIK術中不同持續(xù)時間的負壓吸引引起的瞬時高眼壓對視網膜組織中NO含量及NOS活力及其對視網膜基因譜的影響,并進行綜合分析與評價,探索LASIK手術中瞬時高眼壓引起視網膜神經節(jié)細胞凋亡的相關機制。方法1.實驗分組與動物模型制作:將實驗用68只新西蘭大耳白兔隨機分為正常對照組、實驗對照組、負壓吸引20s組、負壓吸引45s組和負壓吸引3min組,負壓吸引時間分別持續(xù)20s、45s及3min,模擬LASIK手術過程,實驗對照組僅進

2、行激光消融。2.視網膜組織中一氧化氮及一氧化氮合成酶水平測定:各組分別于術后即刻(0d)、7d、10d、14d、28d處死動物,按NO/NOS試劑盒說明進行操作,利用752型分光光度計測各組視網膜組織分光光度值,按公式進一步計算視網膜組織中NO含量及NOS活力。3.視網膜組織基因芯片分析:取正常視網膜組織、負壓吸引3min術后即刻、7天和10天視網膜組織進行Agilent單通道表達譜芯片測定及分析基因譜,觀察LASIK手術過程中凋亡相關

3、基因的變化情況。結果1.視網膜組織中NO含量及NOS活力變化:實驗對照組NO含量及NOS活力與正常對照組相比較差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。負壓吸引20s組、45s組,術后不同修復時間視網膜組織中NO含量及NOS活力比較均無統(tǒng)計學意義(p>0.05),負壓吸引20s組、45s組與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。負壓吸引3min組,術后不同修復時間視網膜組織中NO含量及NOS活力與正常對照組相比較:術后即刻(0d)

4、與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；術后修復7d、10d與正常對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；術后修復14d、28d與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；術后修復7d視網膜組織中NO含量及NOS活力達高峰。No/NOS的變化呈正相關性。2.基因芯片分析表明:①負壓吸引3min術后即刻與正常對照組相比差異表達的基因共有704條。上調基因為485條,其中已知基因為48條,下調基因為219條,其中已知基

5、因為23條；②負壓吸引3min術后7天與正常對照組相比差異表達的基因共有482條。上調基因為178條,其中已知基因為13條；下調基因為304條,其中已知基因為33條；③負壓吸引3min術后10天與正常對照組相比差異表達的基因共有402條。上調基因為213條,其中已知基因為25條；下調基因為189條,其中已知基因為26條。其中與凋亡相關的基因如NF-kB、bcl-2、p53、Fas等均未表現(xiàn)出有意義的改變。結論 LASIK術中常規(guī)負壓吸引