抗腫瘤活性化合物靈芝酸T高效制備方法的研究.pdf

1、靈芝是一味名貴的中草藥，在東亞地區(qū)有著數(shù)千年的藥用歷史。靈芝酸被證明是靈芝中一類(lèi)主要的活性化合物，其具有抑制腫瘤成長(zhǎng)和抗腫瘤轉(zhuǎn)移等重要藥理活性。隨著靈芝菌絲體深層發(fā)酵技術(shù)及兩階段靜置培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展，原材料的供應(yīng)已得到緩解，然而缺乏相對(duì)應(yīng)的靈芝酸高效分離制備技術(shù)依舊阻礙并制約了對(duì)其深度藥物研究和開(kāi)發(fā)。目前，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)關(guān)于高效、低成本特定靈芝酸單體制備工藝的報(bào)道，其主要難點(diǎn)在于特定靈芝酸在靈芝中的含量少、在色譜分離中分離度低、峰疊加情況嚴(yán)重

2、。本學(xué)位論文利用兩階段靜置培養(yǎng)技術(shù)得到靈芝菌絲體為材料探究了抗腫瘤活性化合物靈芝酸T的高效分離制備的策略，并建立了一套低成本、高得率、高純度的靈芝酸T生產(chǎn)工藝模型。
　　本文從二階段培養(yǎng)法生產(chǎn)的靈芝菌絲體中發(fā)現(xiàn)、分離并鑒定出一種新的靈芝酸化合物，根據(jù)習(xí)慣命名法將其稱(chēng)為7-乙氧基靈芝酸O。其在菌絲體內(nèi)的含量為1.2-1.5 g/100 g干菌絲，為其他已鑒定靈芝酸的5-10倍，未見(jiàn)有更高含量的靈芝酸發(fā)現(xiàn)的報(bào)道。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)該

3、靈芝酸可以通過(guò)酸解反應(yīng)轉(zhuǎn)化成靈芝酸T，因此可以作為靈芝酸T生產(chǎn)的前導(dǎo)化合物。
　　7-乙氧基靈芝酸O對(duì)于pH，高溫及極性溶劑均不穩(wěn)定，因此穩(wěn)定性是分離制備該化合物中的核心問(wèn)題。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明：7-乙氧基靈芝酸O在中性，非極性溶劑中穩(wěn)定性最佳。通過(guò)實(shí)驗(yàn)分析，我們計(jì)算了7-乙氧基靈芝酸O在常用溶劑中40℃下的降解反應(yīng)常數(shù)，并測(cè)算出其在甲醇，酸化甲醇（pH=5.1）及含水甲醇（20％含水量）的降解活化能分別為105.8±3.3 kJ/m

4、ol，38.2±3.6 kJ/mol，及103.2±2.4 kJ/mol?；谝陨辖Y(jié)論，我們?cè)O(shè)計(jì)由7-乙氧基靈芝酸O正相色譜分離，結(jié)晶提純和酸解組成的高純度靈芝酸T間接制備工藝。
　　同類(lèi)物雜質(zhì)的分離是天然產(chǎn)物及發(fā)酵產(chǎn)物制備的一大難題。在本文中，通過(guò)分析靈芝菌絲體內(nèi)靈芝酸結(jié)構(gòu)相關(guān)性，我們建立了一套針對(duì)靈芝酸T的預(yù)處理工藝，酸解-乙?；?酸解。該策略可將大部分原本需要丟棄的靈芝酸轉(zhuǎn)化為靈芝酸T，如7-乙氧基靈芝酸O和靈芝酸Mk，因此

5、大大簡(jiǎn)化了粗提液中靈芝酸的種類(lèi)，降低了后期分離純化步驟的難度。經(jīng)處理后，靈芝酸T在粗提液中的質(zhì)量含量及與雜質(zhì)的最小分離度分別從0.44 g/100 g干菌絲和1.05提升至1.69 g/100 g干菌絲和7.90，提升幅度分別約為4倍和7倍。將可轉(zhuǎn)化為靈芝酸T的組分計(jì)入靈芝酸T的初始含量，整個(gè)預(yù)處理過(guò)程中靈芝酸T的回收率在90%左右。在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模（78.5 mL柱體積）下，該方法便可將95%純度的靈芝酸含量提升至每天2.9克。該策略解決