細胞間通訊改變在神經(jīng)外科中的應(yīng)用研究.pdf

1、第一部分低溫對大鼠膠質(zhì)細胞間縫隙連接通訊功能的影響 目的：探討低溫治療對大鼠膠質(zhì)細胞間縫隙連接通訊 (gap junctionalintercellular communication ，GJIC)功能的影響。 材料與方法：由大鼠神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)出神經(jīng)膠質(zhì)細胞至致密單層，分別繼續(xù)在常溫、低溫、常溫輕度缺氧、低溫輕度缺氧培養(yǎng)，利用劃痕標記染料示蹤技術(shù) (scrape-loading and dye transfer，SL

2、DT) 測定GJIC水平。利用PCR、免疫細胞化學(xué)方法觀察溫度影響膠質(zhì)細胞間Cx43表達情況。 結(jié)果：常溫組(組①)染料5min擴散距離為160.5±8.6 μm；低溫組(組②)GJIC 明顯受到抑制，擴散距離為 126.2±10.4 μm；常溫輕度缺氧組(組③)擴散距離為154.1±6.9μm；低溫輕度缺氧組(組④)擴散距離為122.8±6.0μm。①與②、③與④統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異，①與③、②與④無統(tǒng)計學(xué)上差異。 膠質(zhì)

3、細胞30℃培養(yǎng)24h組：標記Cx43 的羅丹明紅色熒光強度值81.7±2.6，單個熒光斑平均相對面積67.82±14.16；膠質(zhì)細胞37℃培養(yǎng)24h組：標記Cx43的羅丹明紅色熒光強度 85.0±7.9，單個熒光斑平均相對面積 234.85±90.99。兩組熒光強度無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)，但37℃培養(yǎng)24h組單個熒光斑平均相對面積大于30℃培養(yǎng)24h 組細胞(p<(0.01)，具有顯著差異。 Rea-time PCR結(jié)果：

4、37℃組Cx43 信號通路基因的表達量是30℃組的2.67倍。應(yīng)用統(tǒng)計軟件 SPSS11.0 進行方差分析，p<0.05 說明兩組的Cx43信號通路基因的表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：低溫降低神經(jīng)膠質(zhì)細胞問GJIC功能，可能是低溫治療顱腦創(chuàng)傷有效的作用機制之一。 第二部分腦蛋白水解液對大鼠膠質(zhì)細胞縫隙連接通訊的研究 目的：探討腦蛋白水解液對大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞間縫隙連接通訊(gapjunctional interc

5、ellular communication ，GJIC) 功能的影響。 材料和方法：由大鼠神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)出神經(jīng)膠質(zhì)細胞至致密單層，分為給藥組①、對照組②、TPA陽性對照組③繼續(xù)培養(yǎng)，利用劃痕標記染料示蹤技術(shù)(scrape-loading and dye transfer，SLDT)，以熒光染料在細胞間的擴散作為評價縫隙連接通訊的指標，測定腦蛋白水解液對大鼠膠質(zhì)細胞縫隙連接通訊的影響；RT-PCR 法檢測給藥組和對照組細胞Cx

6、43mRNA 表達變化。造成輕度缺氧實驗分組：④常氧對照組，⑤常氧給藥組，⑥輕度缺氧對照組，⑦輕度缺氧給藥組，⑧TPA陽性對照組，檢測GJIC。 結(jié)果：腦蛋白水解液組染料5min擴散距離為189.8±6.6 μm；對照組擴散距離為154.7±6.0μm；組間統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異(p<0.05)；RT-PCR 檢測結(jié)果顯示給藥組細胞中Cx43mRNA表達高于對照組細胞(P<0.05)。組④染料5min擴散距離為157.5±5.9 μ

7、m；組⑤擴散距離為198.2±8.8μm；組⑥染判5min擴散距離為153.8±7.6 μm；組⑦擴散距離為195.9±12.9 μm。組④與組⑤、組⑥與組⑦統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異(p<0.01)；組④與組⑥、組⑤與組⑦無顯著性差異(p>0.05)。 結(jié)論：在本實驗條件下，無論常氧還是輕度缺氧條件下，腦蛋白水解液可增強大鼠膠質(zhì)細胞縫隙連接通訊，增強膠質(zhì)細胞 Cx43mRNA 表達，提示腦蛋白水解液可能通過增強 CJIC 對膠質(zhì)細胞起

8、一定作用。 第三部分低溫抑制兔血管平滑肌細胞間縫隙連接通訊的研究 目的：探討凝血塊混合物對血管平滑肌縫隙連接通訊 (gap junctionalintercellular communication，GJIC) 功能的影響，闡明低溫治療具有抑制此種GJIC的作用。 資料和方法：培養(yǎng)兔血管平滑肌細胞至致密單層，分別加凝血塊混合物在常溫、低溫下培養(yǎng)組，以及無凝血塊混合物的常溫培養(yǎng)組，利用劃痕標記染料示蹤技術(shù)(scra

9、pe-loading and dye transfer，SLDT)測定GJIC水平。 結(jié)果：加凝血塊混合物常溫組(組①) 染料5min 擴散距離較無凝血塊混合物的常溫培養(yǎng)組(組②)遠；加凝血塊混合物低溫組(組③)擴散距離較組①染料5min擴散距離明顯縮短。①與②、①與③統(tǒng)計學(xué)上有統(tǒng)計學(xué)意義(P(0.01)。 結(jié)論：凝血塊混合物具有增強血管平滑肌細胞 GJIC 的功能；低溫具有降低此種WTIC功能的作用，可能是低溫治療蛛網(wǎng)