紫花苜蓿品種特異性的RAPD分子標記.pdf

1、我國苜蓿種質(zhì)資源豐富，發(fā)展形成了各具特色的品種，以往其鑒定多依賴于形態(tài)學標記等傳統(tǒng)方法；由于DNA分子標記直接以遺傳物質(zhì)DNA為研究對象，它不受環(huán)境因素影響，多態(tài)性高，所以對苜蓿品種的客觀、快速鑒定有重要意義。 本文以中國牧草審定委員會審定登記的四個紫花苜蓿品種(中苜一號、肇東苜蓿、甘農(nóng)三號、公農(nóng)一號)的幼苗單株DNA為研究對象，采用RAPD標記技術，用群分法和具有品種特異條帶的單株比例分析品種DNA序列間的差異以及差異的穩(wěn)定性

2、。試圖獲得可以區(qū)分四個供試紫花苜蓿品種的特異性RAPD標記。 結果如下：1.采用CTAB法提取基因組DNA，得到純度高、完整性好的基因組DNA。 2.通過設置退火溫度梯度，得到適宜RAPD技術進行品種鑒定的退火溫度。 3.通過對RAPD反應體系中的反應物逐一設置梯度，得到優(yōu)化的適宜進行品種鑒定的RAPD體系。采用該反應體系，在反應體系中各種試劑來源、濃度保持一致的前提下，嚴格按照反應程序中各個環(huán)節(jié)的要求操作，RA

3、PD技術表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性和可重復性。 4對120-條RAPD隨機引物經(jīng)過初步篩選和重復篩選，共有34條引物產(chǎn)生多態(tài)性條帶，其中S1,S78,S89,S91,S115等5條引物能夠擴增出明顯的品種特異性條帶，或者帶譜中出現(xiàn)特異性條帶的缺失。這些特異性條帶(包括缺失條帶)可以作為品種鑒定的特異性標記。 5本實驗應用篩選出的RAPD標記引物對各供試品種單株DNA的擴增結果表明，篩選出的RAPD標記引物對各品種單株擴增，擴增后