冠心病患者M(jìn)BL、CRP以及肺炎衣原體感染的變化及其相關(guān)性分析.pdf

1、目的：冠心病是最常見(jiàn)的心血管疾病之一，是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。近年來(lái)，感染、炎癥與冠心病的關(guān)系成為研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)的目的在于檢測(cè)冠心病患者與健康對(duì)照者M(jìn)BL基因Exon I54位密碼子點(diǎn)突變情況，同時(shí)測(cè)定血漿中MBL與CRP含量及肺炎衣原體感染情況，旨在通過(guò)分析這些因素的變化及相關(guān)性，探討冠心病的可能致病機(jī)制，為其輔助診斷和治療提供依據(jù)。 方法： 1 標(biāo)本的收集與處理取100例冠心病

2、(CHD)病人和60例健康對(duì)照人抗凝血，2小時(shí)內(nèi)分離血漿與細(xì)胞成分，血漿于-80℃保存，供測(cè)定MBL含量、CRP及肺炎衣原體；用鹽酸胍法提取血細(xì)胞中DNA，-80℃冰凍保存，供MBL基因突變檢測(cè)。 2 測(cè)試標(biāo)本 (1)用PCR-RFLP法測(cè)試MBL Exon I 54位密碼子基因點(diǎn)突變：擴(kuò)增體系為50μl，其中10×Buffer 5μl，dNTP(2.5mmol/L)4μl，primerl(50μmol/L)0.4μl，

3、primer2(50μmol/L)0.4μl，TaqDNA聚合酶(5U/μl)0.5μl，模板4μl，滅菌三蒸水補(bǔ)至50μl。擴(kuò)增參數(shù)為：預(yù)變性95℃5分鐘；95℃45秒、55℃45秒，72℃1分鐘，循環(huán)30次； 末延伸72℃ 5分鐘。擴(kuò)增產(chǎn)物用TAE配制含0.5μg/ml溴化乙啶2％的瓊脂糖凝膠電泳，加樣5μl/孔，電泳30分鐘；PCR Marker作為參照，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶(Bsh N1)酶切：酶

4、切體系為20μl，其中：Bsh N1(10u/μl)0.5 μl，10×Buffer 2μl，DNA擴(kuò)增產(chǎn)物17.5μl，37℃水浴反應(yīng)1小時(shí)，酶切產(chǎn)物用3％的瓊脂糖凝膠電泳分析。根據(jù)酶切結(jié)果，針對(duì)性的選擇部分完全切割、不完全切割和未切割的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，進(jìn)行序列分析比對(duì)。 (2)血漿MBL含量測(cè)定：按MBL ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)。 (3)用肺炎衣原體IgG ELISA試劑盒測(cè)定衣原體感染情況。 (4)免疫比濁法測(cè)

5、定Hs-CRP含量，在全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行。 結(jié)果： 1 冠心病組、健康對(duì)照組MBL基因Exon 154位密碼子點(diǎn)突變頻率100例冠心病人MBL基因ExonI 54位密碼子點(diǎn)突變情況，在所檢測(cè)到的100例中，野生型(GGC/GGC)為73例，占73％；突變雜合子型(GGC/GAC)為25例，占25％；突變純合子型(GAC/GAC)為2例，占2％。基因頻率分別為GGC為85.5％，GAC為14.5％。 60例健康

6、對(duì)照組MBL基因ExonI 54位密碼子點(diǎn)突變情況，在所檢測(cè)到的60例中，野生型(GGC/GGC)為45例，占75％；突變雜合子型(GGC/GAC)為13例，占27.67％；突變純合子型(GAC/GAC)為2例，占3.32％。基因頻率分別為GGC為85.8％，GAC為14.2％。經(jīng)x<'2>檢驗(yàn)，x<'2>=0.007，p=0.934，冠心病組、健康對(duì)照組基因點(diǎn)突變頻率的比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 血漿MBL含量測(cè)定100例冠心

7、病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L，標(biāo)準(zhǔn)差為3209；60例健康對(duì)照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L，標(biāo)準(zhǔn)差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。 3 冠心病組、健康對(duì)照組抗肺炎衣原體抗體(CP IgG)的測(cè)定100例冠心病人血漿CP IgG陽(yáng)性51例，占51.00％；60例健康對(duì)照組血漿CP IgG陽(yáng)性20例，占33.33％，二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。

8、 4 冠心病組與健康對(duì)照組血漿中CRP含量比較分析100例冠心病人血漿CRP含量的平均值為10.257 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)差為12.216；60例健康對(duì)照組血漿CRP含量的平均值為1.488 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)差為1.558，二者比較差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。 5 冠心病人CP IgG陽(yáng)性和陰性組血漿MBL含量的比較按CP IgG陽(yáng)性和陰性將冠心病人分為兩組，CP IgG陽(yáng)性組和陰性組的血漿MBL均值(±SD)分別為3

9、819(±3090)μZ/L和3985(±3359)μg/L，經(jīng)t檢驗(yàn)二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 6 冠心病人CP IgG陽(yáng)性和陰性組血漿CRP含量的比較按CP IgG陽(yáng)性和陰性將冠心病人分為兩組，CP IgG陽(yáng)性組和陰性組的血漿CRP均值(±SD)分別為10.439(± 13.451)mg/L和10.068(±10.921)mg/L，經(jīng)t檢驗(yàn)二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 7 冠心病組血漿中CRP與MBL含

10、量比較及相關(guān)性分析按CRP水平升高(>3mg/L)與否將冠心病人分為兩組，CRP水平升高組和CRP水平正常組的血漿MBL均值(±SD)分別為3723(±2783)μg/L和4258(±3961)μg/L，經(jīng)t檢驗(yàn)二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 在100例冠心病樣本中，CRP與MBL含量使用Pearson相關(guān)性分析，r=0.144，p=0.245，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)二者有相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論： 本研究對(duì)中國(guó)北方漢族冠心病患者

11、和健康對(duì)照的MBL基因54位密碼子點(diǎn)突變，MBL，CPIgG和CRP進(jìn)行了檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)以下3點(diǎn)： 1 MBL基因54位密碼子點(diǎn)突變?cè)诠谛牟〗M、健康對(duì)照組分別為14.5％和14.2％，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 2 血漿MBL，CRP均值(±SD)在冠心病組分別為3900(±3209)μg/L和10.26(±12.22)mg/L，在健康對(duì)照組分別為2056(±1824)μg/L和1.49(±1.56)mg/L。這兩項(xiàng)指標(biāo)

12、在冠心病組較健康對(duì)照組均顯著升高，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。 MBL與CRP屬于炎癥急性期蛋白，這兩項(xiàng)指標(biāo)在冠心病組較健康對(duì)照組均顯著升高，提示該兩項(xiàng)指標(biāo)在冠心病診斷和發(fā)生機(jī)理中的作用應(yīng)該進(jìn)一步研究。雖然MBL和CRP在冠心病人顯著升高，但是這兩項(xiàng)指標(biāo)之間不顯示相關(guān)，提示它們可能以不同機(jī)理參與冠心病發(fā)生。 3 冠心病組血漿CP IgG陽(yáng)性率為51.00％，健康對(duì)照組為33.33％，CP IgG在冠心病人中的陽(yáng)