轉化生長因子β1在擴張囊外纖維包膜中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：探討轉化生長因子β1（Transforming Growth Factor-Betal，TGF-β1）在擴張囊外纖維包膜中的表達及臨席意義，明確擴張囊外纖維包膜成纖維細胞形成與變化的原因，進一步研究控制擴張囊外纖維包膜形成與變化的方法，以提高擴張后皮瓣修復皮膚軟組織缺損及器官再造的成功率。
　　 方法：
　　 1、臨床資料
　　 本組病例均為2007年以來我科收治的患者，共計30例。每個患者均應用一個或多個

2、擴張器行皮膚軟組織擴張術，以擴張皮瓣修復不同部位的各種病變所致的皮膚軟組織缺損。其中男性16人，女性14人，年齡17歲至33歲，平均年齡為26歲。
　　 2、分組
　　 實驗分為兩組：實驗組和對照組，各30例。本實驗采用自身對照。實驗組取材于擴張囊外纖維包膜。對照組取材為一期手術擴張器植入時所剝離腔隙中與擴張器相鄰的皮下組織。即原擴張器旁組織（軀干為皮下脂肪組織，頭部為冒狀腱膜和皮下脂肪組織復合體）。
　　 3、

3、擴張器植入及注水方法
　　 本組病例均在局部麻醉下進行。術中將患者擴張器植入腔隙剝離完成后，以雙極電凝徹底止血，觀察無活動性出血后，植入相應皮膚軟組織擴張器。待術后第八天開始擴張注水，擴張方法采用常規(guī)擴張，無麻醉狀態(tài)下注水，隔2-5日注水擴張一次，每次注水量視皮瓣張力大小而定，以皮瓣血管指壓反應4-5秒為限。每只皮膚軟組織擴張器注水達到額定擴張容量的1.5倍后停止注水。
　　 4、取材
　　 對照組于擴張器植入即

4、一期手術時取材，局部麻醉狀態(tài)下，手術切取擴張器旁任意部位1cm×1cm大小皮下組織，平鋪于無菌紗布上，四角固定，標本經(jīng)PBS液沖洗后放入4％中性戊二醛固定，制作石蠟切片，其中石蠟切片分別作常規(guī)。HE染色、Masson染色及免疫組化。切取0.1cm×0.1cm×0.3cm大小皮下組織標本，以中性甲醛固定，送透射電鏡觀察。
　　 實驗組于完成擴張后即二期手術時取材，局部麻醉狀態(tài)下，手術切取擴張器表面任意部位1cm×1cm大小纖維包膜

5、標本，平鋪于無菌紗布上，四角固定，標本經(jīng)PBS液沖洗后放入4％中性戊二醛固定，制作石蠟切片，石蠟切片分別作常規(guī)HE染色、Masson染色及免疫組化。切取0.1cm×0.1cm×0.3cm大小纖維包膜標本，以中性甲醛固定，送透射電鏡觀察。
　　 5、觀測指標
　　 （1）光鏡下觀察常規(guī)HE染色切片的組織學結構差異；光鏡下觀察：Masson染色切片，比較實驗組和對照組標本中膠原纖維的含量差異；光鏡下觀察免疫組化顯色的強弱，比

6、較實驗組和對照組纖維包膜中TGF-β1含量。（2）透射電鏡下觀察實驗組和對照組標本成纖維細胞數(shù)量，以對比兩組中成纖維細胞分泌膠原的差異。
　　 結果
　　 1.光鏡觀察
　　 1.1 HE染色
　　 光鏡下可見：（1）實驗組：可見大量的成纖維細胞，并有新生薄壁的毛細血管散在于視野中；并有大量中幼稚期的成纖維細胞，幼稚期的成纖維細胞胞體較大，兩端常有突起，胞漿呈藍色；而對照組中可見大量的脂肪細胞，偶見成熟期

7、的成纖維細胞（纖維細胞），及散在的毛細血管，并可見散在的中性粒細胞。實驗組中幼稚期的成纖維細胞數(shù)目遠多于對照組是其最重要特點。
　　 1.2 Masson染色
　　 光鏡下觀察Masson染色切片，實驗組：纖維包膜全層綠色，成纖維細胞多呈長梭形，松散分布，有散在內皮細胞樣梭形細胞。對照組：原擴張器旁組織全層成灰色，偶見成纖維細胞，核呈灰黑色，卵圓形，排列疏松。
　　 1.3免疫組織化學染色
　　 實驗組在

8、纖維包膜組織中，TGF-β1蛋白陽性表達的黃色顆粒主要分布于成纖維細胞的胞漿內及細胞外基質中，且染色強，面積大。而在對照組中，陽性顆粒主要分布在間質血管周圍的成纖維細胞內，且染色弱。30例患者纖維包膜組織TGFβ1蛋白的免疫組化染色均示陽性表達，陽性率100％，與對照組對比二者有顯著差異（表1），x2檢驗，P<0.01，并且纖維包膜高表達為21例，低表達為9例，也明顯高于對照組（表2），x2檢驗，P<0.01，二者也有顯著差異。

9、　　 2.透射電鏡觀察
　　 實驗組：成纖維細胞內可見擴張的粗面內質網(wǎng)，少見脫顆?，F(xiàn)象，線粒體嵴基本完整，可見許多明顯的微絲結構，核糖體數(shù)量未見明顯減少。成纖維細胞長梭形，細胞核呈長橢圓形，胞質內有大量粗面內質網(wǎng)，有許多線粒體。粗面內質網(wǎng)高度擴張成池狀。有一個不典型的高爾基復合體。細胞質內有微絲，有許多游離核糖體。常染色質豐富，細胞周圍有許多成熟的膠原纖維。對照組：成纖維細胞內粗面內質網(wǎng)擴張成池狀，數(shù)量明顯少，脫顆粒現(xiàn)象明顯，

10、線粒體部分或大部分嵴融合或消失，偶見正常高爾基氏體，未見或偶見微絲結構，游離核糖體數(shù)量減少。
　　 結論
　　 （1）在實驗組擴張包膜中TGF-β1蛋白的陽性表達明顯高于對照組，P<0.01，二者有顯著差異，證實了TGF-β1與擴張囊外的纖維包膜產生有著密切關系，是該瘢痕組織產生的重要原因，（2）在成纖維細胞內TGF-β1蛋白水平的過度表達表明，成纖維細胞過度分泌膠原亦是促進纖維包膜形成的原因。上述研究發(fā)現(xiàn)為臨床上控制纖