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文檔簡介
1、檢疫性Phoma寄主范圍極為廣泛,危害豆科、十字花科、茄科等幾十個屬的上百種植物,能侵染寄主各個部位。導致作物產(chǎn)量下降、品質(zhì)降低,甚至死亡,造成巨大的經(jīng)濟損失。本文在深入研究了莖基潰瘍病菌(Leptosphaeria maculans)、豌豆莖點霉(Phoma pinodes)、豌豆腳腐病菌(P.pinodella),葡萄莖枯病菌(P.glomerata)等12個種共21個菌株的生物學特性基礎上,重點對Phoma孢子活性染色方法和P.p
2、inodella、P.glomerata、P.terrestris、P.tracheiphila四種Phoma檢疫性代表種小分子多肽的檢測鑒定方法進行了研究,探索出Phoma孢子活性染色方法及檢疫性Phoma小分子多肽檢測方法,研究結果如下:
Phoma屬12個種21個菌株的生物學特性研究表明,Phoma菌株在菌落形態(tài)、生長速度、產(chǎn)孢等方面有顯著差異,其中檢疫性豌豆腳腐病菌(P.pinodella)種內(nèi)菌落形態(tài)也有較大差異,菌
3、落圓形,白色、棕色、紅棕色,部分呈淺黃色、黑色和墨綠色等。分生孢子單孢、無色或淺綠色,透明、薄壁,球形、橢圓形或長桿狀,部分梨形,少量菌株孢子有一個或兩個油球。分生孢子器球形、近球形,外壁呈黑色或褐色。
通過孢子萌發(fā)時間、致死溫度、活性染色所需染料種類、濃度、染色時間等條件的篩選,確定了P.glomerata、P.errestris2種檢疫性莖點霉的孢子致死溫度為52℃和50℃。根據(jù)碘化丙啶染料使死細胞與活細胞在不同波長激光光
4、源激發(fā)下產(chǎn)生的熒光強度不同,篩選出使用濃度為1mg/ml的PI染液能夠明顯區(qū)分死孢子和活孢子。建立Phoma的孢子活性檢測方法,并對該方法進行了重復性驗證。
以PD液體培養(yǎng)五天的P.glomerata、P.pinodella、P.terrestris、P.tracheiphila四個代表種用勻漿+SDT裂解法提取蛋白后,進行iTRAQ分析,確定了四種檢疫性Phoma真菌種的差異蛋白。以篩選標準Ratio>2且P<0.05,刪除
5、預測蛋白,篩選出四組樣品中特異性表達蛋白數(shù)目分別為33、17、41、16種。其中差異顯著的蛋白主要為葡萄莖枯病菌株中的Dipeptidyl-peptidase5、50Sribosomal protein L6、Scytalone dehydratase、Methylthio-ribulose-1-phosphate dehydratase、1,3,6,8-tetrahyd roxynaphthalene reductase蛋白;豌豆腳腐
6、病菌株中的Diaminopropionate ammonialyase、SURF-family protein Shy1、Ankyrin repeat and SAM domain containing protein6、Conidialyellow pigment biosynthesis polyketide synthase、3'-phosphoadenosine5'-phosphatase isoform A、Mycoceros
7、ic acid synthase蛋白;大蔥抗粉根病菌株中的Translationally-controlled tumor protein、ATP-dependent RNA helicase DBP5、Acetyltransferase component of pyruvate dehydrogenase complex、Probable Xaa-Pro aminopeptidase PEPP、Delta(12)fatty acid
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