HPV16E7-,11-20-的氨基酸置換修飾.pdf

1、目的:HLA-A2限制性9肽表位的2個(gè)主要錨點(diǎn)是位于肽鏈第2位的氨基酸殘基和第9位的氨基酸殘基(即羧基末端),當(dāng)?shù)?位的氨基酸殘基為亮氨酸(L)或蛋氨酸(M),第9位的氨基酸殘基為亮氨酸(L)、纈氨酸(V)或異亮氨酸(Ⅰ)時(shí),多肽與HLA-A2分子親和力較高,成為HLA-A2限制性CTL表位的可能性極大,對(duì)表位采取氨基酸置換修飾的方式,可以鑒定出結(jié)合力更高又同時(shí)保留原有抗原性的新表位。本研究采用氨基酸置換對(duì)人乳頭瘤病毒16型E7抗原的人

2、白細(xì)胞抗原A2分子限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞表位HPV16E711-20進(jìn)行修飾和鑒定。
　　 方法:運(yùn)用量化模體方案對(duì)置換后的多肽與人白細(xì)胞抗原A2分子的結(jié)合系數(shù)進(jìn)行比較,選擇結(jié)合系數(shù)較高的多肽、以分子模擬方法探討多肽與人白細(xì)胞抗原A2分子的結(jié)合情況,模擬結(jié)合較好的多肽確定為合成序列,采用標(biāo)準(zhǔn)Fmoc方案進(jìn)行合成與純化目標(biāo)多肽,以標(biāo)準(zhǔn)51Cr釋放試驗(yàn)檢測特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞誘導(dǎo)活性來鑒定合成肽的免疫原性。
　　 結(jié)果:經(jīng)過氨

3、基酸置換修飾后的多肽,結(jié)合系數(shù)顯著提高,分子模擬結(jié)合表明修飾多肽符合人白細(xì)胞抗原A2分子限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的表位要求,合成肽純度符合實(shí)驗(yàn)要求,質(zhì)譜鑒定表明合成肽實(shí)際分子量與理論分子量相符。經(jīng)過免疫原性鑒定,修飾后的十肽YLLDLQPEVT能夠誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞殺傷效應(yīng),具有特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞誘導(dǎo)活性。
　　 結(jié)論:氨基酸置換修飾后的多肽表位YLLDLQPEV工具有更好的結(jié)合力和較強(qiáng)的免疫原性,可以代替原有序列E711-20(Y