中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷對內(nèi)皮性脂酶表達影響的體內(nèi)外研究.pdf

1、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervoussystem，CNS)損傷后軸突再生困難，一直是臨床神經(jīng)疾病治療的難點，長期以來，人們通過各種途徑尋找其原因并試圖攻克這一難關(guān)。近年來的研究表明，CNS受損后軸突不能再生可能有以下幾個方面的原因：成年神經(jīng)元損傷后本身的再生能力下降；膠質(zhì)瘢痕的形成；神經(jīng)營養(yǎng)因子的缺乏及軸突再生抑制蛋白的作用等。對于CNS損傷后功能的修復，目前尚無有效方法，主要是依靠其自身的修復能力，臨床治療只是一些輔助措施，但效

2、果均不盡如人意。 內(nèi)皮性脂酶是近年來發(fā)現(xiàn)的甘油三酯脂酶基因家族的新成員。1999年，Hirata從人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HumanUmbilicalVeinEndothelialCells，HUVEC)中分離出一種新的cDNA片段，這種片段似乎是編碼一種類似脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase，LPL)的新基因。同年，Jaye等從氧化型低密度脂蛋白(oxidationoflowdensitylipoprotein，ox-L

3、DL)刺激下的THP-1(從一位女性急性單核細胞白血病患者獲得的人單核細胞系)細胞中提取mRNA，然后以其為模板合成cDNA并對其進行分析，發(fā)現(xiàn)一種新的基因。這種基因核苷酸序列與LPL有44％相同，與肝脂酶(hepaticlipase，HL)有41％的相同，與胰脂酶(pancreaslipase，PL)有31％的基因序列相同。這些發(fā)現(xiàn)均強烈提示這種新的cDNA編碼的產(chǎn)物與LPL、HL和PL來源于一個共同的脂酶祖先基因，因此被確定為甘油三

4、酯脂酶基因家族的新成員，并命名為內(nèi)皮性脂酶(endotheliallipase，EL)，相應的基因依照這個基因家族的基因命名法被命名為LIPG。目前，國外有關(guān)的研究正在進行，尚有許多需要解決的問題，國內(nèi)未見相關(guān)研究報道。那么，與LPL、PL同源的內(nèi)皮性脂酶具有什么作用？ 目的:建立CNS體內(nèi)、外損傷模型，檢測CNS損傷后內(nèi)皮性脂酶表達水平的變化情況，以探究內(nèi)皮性脂酶在CNS損傷后軸突再生與修復中的作用。 方法:取新生SD

5、大鼠(PO-P3)腦皮質(zhì)，進行混合膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)，根據(jù)各種膠質(zhì)細胞黏附性及生長時間的差異，通過機械振蕩法和差速貼壁法獲得純化的星形膠質(zhì)細胞，對其進行機械性損傷，收集損傷后不同時間點(OH、1H、3H、6H、12H、24H、48H)及正常星形膠質(zhì)細胞；雄性成年SD大鼠，參照Tuszynski的方法行制備脊髓半橫斷損傷模型，取損傷后不同時間點(12H、1天、3天、5天、1周、2周、4周)、假手術(shù)組(Cont)及正常(N)的脊髓組織；免疫

6、組織化學標記和westernblot檢測CNS損傷后內(nèi)皮性脂酶和凋亡促進因子caspase-3的表達水平。 結(jié)果:星形膠質(zhì)細胞在機械性損傷后內(nèi)皮性脂酶的表達增高，于6H處達到峰值，與正常組相比差異具有顯著性(P<0.01)，隨后表達漸趨下降；caspase-3在損傷后1H出現(xiàn)表達增高并達峰值，與對照組比較差異具有顯著性(P<0.01)，其后表達水平雖然有所下降，但至損傷后48H仍處于高表達水平。脊髓半橫斷損傷后內(nèi)皮性脂酶于3天開