毛細(xì)管電泳法測定中藥制劑多組分和穩(wěn)定性研究.pdf

1、安全、有效、質(zhì)量可控是藥物制劑的基本特性。穩(wěn)定性則是保證安全和有效的重要條件。中藥制劑在制備和貯存過程中，因受到外界因素的影響，易發(fā)生變質(zhì)，導(dǎo)致藥效降低，毒性增大，影響藥物制劑的治療效果。所以從藥物制劑的生產(chǎn)到使用，都需要研究穩(wěn)定性。通過穩(wěn)定性試驗，考察中藥在不同條件下藥品隨時間變化的規(guī)律，為認(rèn)識藥品的穩(wěn)定趨勢提供科學(xué)依據(jù)。 中藥制劑是指以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，以中藥材為原料，按規(guī)定的處方和工藝加工成一定劑型的、供臨床使用的藥物?，F(xiàn)

2、有關(guān)于中藥制劑穩(wěn)定性的研究基本上沿用單一活性成分或指標(biāo)成分作為控制質(zhì)量的指標(biāo)進行考察。中藥制劑成分極為復(fù)雜，含多種活性成分，難以用其中一兩種有效化學(xué)成分加以表征。因為中藥是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下使用的，按方配伍、按量配伍是中藥的特點。多指標(biāo)量的變化可以反映中藥配伍的變化，在一定程度上反映中藥制劑功效的變化。所以選擇中藥中代表不同類成分的多個組分同時考察，通過研究多組分隨時間量的變化和比例的變化考察中藥制劑的動態(tài)穩(wěn)定性，更加科學(xué)。 毛細(xì)

3、管電泳技術(shù)(capillary electroplloresis；CE)具有多種分離模式，通過模式的選擇，可同時分析不同性質(zhì)的成分，特別適用于由多種藥材組成的含有大量不同種類成分的中藥復(fù)方制劑的分析。本文采用CE法對中藥制劑多指標(biāo)成分檢測方法和中藥制劑的穩(wěn)定性進行了研究：利用CE分析方法測定了小兒消熱止咳口服液、柴連口服液、清開靈口服液等制劑中多種成分的含量，建立了適合中藥制劑多指標(biāo)成分的分析方法，為研究中藥制劑穩(wěn)定性建立基礎(chǔ)；通過考察

4、雙黃連口服液和銀黃口服液的多指標(biāo)成分含量和組分間相對比例隨時間的變化，探討中藥制劑在高溫影響因素試驗下能否保持多種組分的相互配伍作用。研究結(jié)果表明：(1)具有多分離模式的CE法可以同時分離測定中成藥中的各類成分，適合用于中藥制劑的穩(wěn)定性研究。(2)高溫影響因素會對雙黃連口服液和銀黃口服液中各組分含量的變化和組分間相對比例的變化產(chǎn)生較大的影響，使中藥多組分的相互作用發(fā)生了變化，根據(jù)中醫(yī)配伍理論，中藥制劑的功效也發(fā)生了相應(yīng)變化。 一

5、、CE法測定中藥制劑中多指標(biāo)成分的研究 (一)CE方法測定小兒清熱止咳口服液中麻黃堿、黃芩苷和甘草酸 目的：通過建立CE法測定小兒清熱止咳口服液中麻黃堿、黃芩苷和甘草酸的含量，為CE法能較好的評價和控制復(fù)方中藥的質(zhì)量提供依據(jù)，為研究中藥制劑穩(wěn)定性建立基礎(chǔ)。 方法：以未涂層彈性融硅毛細(xì)管(50cm×50μm，有效分離長度45cm)為分離通道，25mmol·L-1硼砂緩沖液(pH 8.60)作為電泳介質(zhì)，壓力進樣，進

6、樣時間6s，運行電壓10kV，檢測波長192nm。 結(jié)果：麻黃堿、黃芩苷、甘草酸分別在4.00×10-3～0.225mg·mL-1 、 2.40×10-3～1.50mg·mL-1 、2.10×10-2～1.33 mg·ml-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性天系良好，3者加樣回收率分別為98.3％、98.4％、97.1％。結(jié)論：CE法同時測定中藥制劑中的多組分簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于中藥制劑的質(zhì)量控制，可作為穩(wěn)定性研究的分析手段。

7、 (二) CE方法測定柴連口服液中麻黃堿、偽麻黃堿、蘆丁和肉桂酸 目的：利用CE法測定柴連口服液中鹽酸麻黃堿、偽麻黃堿、蘆丁和肉桂酸的含量，為CE法能較好的評價和控制復(fù)方中藥的質(zhì)量提供依據(jù)，為研究中藥制劑穩(wěn)定性建立基礎(chǔ)。 方法：利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳紫外檢測法測定4個指標(biāo)成分的含量，并研究了各種條件的影響，得到了優(yōu)化的試驗條件：以未涂層彈性石英毛細(xì)管(40cm×50μm，有效分離長度35cm)為分離通道，25mmol·L-1

8、硼砂緩沖液(pH8.50)-乙醇10:1作為電泳介質(zhì)，壓力進樣，進樣時間5s，運行電壓10kV，檢測波長192nm。 結(jié)果：鹽酸麻黃堿、偽麻黃堿、蘆丁和肉桂酸分別在30.0～196μg·mL-1、51.0～328μg·mL-1、43.0～276μg·mL-1、31.0～204μgVmL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不低于0.9987，回收率均在98.3％～99.4％范圍內(nèi)。 結(jié)論：CE法同時測定中藥制劑中的多

9、組分簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于中藥制劑的質(zhì)量控制，可作為穩(wěn)定性研究的分析手段。 (三) CE方法測定清開靈口服液中黃芩苷和綠原酸 目的：通過清開靈口服液中黃芩苷和綠原酸含量測定的毛細(xì)管電泳法的建立，為CE法能較好的評價和控制復(fù)方中藥的質(zhì)量提供依據(jù)，為研究中藥制劑的穩(wěn)定性建立基礎(chǔ)。 方法：利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳紫外檢測器測定黃芩苷和綠原酸的含量。電泳條件：以未涂層彈性融硅毛細(xì)管(40cm×50μm，有效分離長度35c

10、m)為分離通道，25mmol·L-1硼砂緩沖液(pH8.50)作為電泳介質(zhì)，壓力進樣，進樣時間5s，運行電壓15kV，檢測波長254nm。 結(jié)果：黃芩昔和綠原酸分別在0.119～7.62mg.mL-1、3.40×10-2～2.18mg·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不低于0.9992。加樣回收率分別為100.2％、97.1％。 結(jié)論：CE法同時測定中藥制劑中的多組分簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于中藥制劑的質(zhì)

11、量控制，可作為穩(wěn)定性研究的分析手段。 二、CE法研究中藥制劑的穩(wěn)定性 (一)CE法研究雙黃連口服液的穩(wěn)定性 目的：建立一種雙黃連口服液中綠原酸、黃芩苷和連翹苷含量測定的毛細(xì)管電泳方法，以此方法為檢測手段，考察在高溫下上述3種成分含量及相對比的變化。 方法：按照中藥、天然藥物指導(dǎo)原則三(一)項下高溫試驗方法，將供試品置于密封潔凈容器中，在60℃條件下放置10天，于0、5、10天取樣，檢測相關(guān)指標(biāo)綠原酸、黃芩苷和連

12、翹苷的含量。與0天比較，考察上述成分含量的變化及相對量比例的變化。 電泳條件毛細(xì)管：40cm×50μm(有效長度35cm)；電泳介質(zhì)：40mmol·L-1硼砂.40mmol·L-1SDS溶液(pH 8.30)-10％乙腈；電壓：10kV；電流：約8μA；檢測波長：192 nm。 結(jié)果：通過10天的考察，3批樣品中綠原酸、黃芩昔和連翹苷含量均有不同程度的下降，且下降速度不同。黃/連、綠/連的比值亦有變化。 結(jié)論：在

13、中醫(yī)理論指導(dǎo)下使用的中藥制劑療效的發(fā)揮是多種組分相互作用的結(jié)果。雙黃連口服液在60℃下放置10天，代表全部3種藥材的指標(biāo)成分綠原酸、黃芩苷和連翹苷含量均有下降，同時相對比例亦產(chǎn)生了變化。中藥多組分的相互配伍作用發(fā)生了變化，不符合中醫(yī)配伍理論，進而影響中藥制劑的安全和療效。 (二)CE法研究銀黃口服液的穩(wěn)定性 目的：建立一種銀黃口服液中綠原酸和黃芩苷含量測定的毛細(xì)管電泳方法，以此方法為檢測手段，考察在高溫下上述3種成分含量

14、及相對比的變化。 方法：按照中藥、天然藥物指導(dǎo)原則三(一)項下高溫試驗方法，將供試品置于密封潔凈容器中，在60℃條件下放置10天，于0、5、10天取樣，檢測相關(guān)指標(biāo)黃芩苷和綠原酸的含量。與O天比較，考察上述成分含量的變化及相對量比例的變化。 電泳條件毛細(xì)管：40cm×50μm(有效長度35cm)；電泳介質(zhì)：40mmol·L-1四硼酸鈉溶液(pH8.30)；電壓：20kV：檢測波長：310nm。 結(jié)果：通過10天的