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文檔簡介
1、青海云杉(Picea crassifolia Kom.)屬于松科(Pinaceae)云杉屬(Picea),是我國特有的常綠針葉喬木,是西北地區(qū)重要的造林和城市綠化樹種。本論文主要對甘肅省張掖龍渠青海云杉無性系種子園的125個無性系進行了兩方面的研究:(1)青海云杉ISSR-PCR反應體系的建立和優(yōu)化,以及引物的篩選;(2)基于ISSRs的青海云杉無性系的遺傳多樣性和遺傳關系的研究。
采用正交試驗設計和單因素分析方法,建立了青海
2、云杉ISSR-PCR最適反應體系。在20.0μL反應體系中包含:模板DNA(5-10ng·μL-1)2.0μL、Mg2+(25mmol·L-1)2.8μL、10×PCR緩沖液2.8μL、引物(10μmol·L-1)0.8μL、dNTPs(10mmol·L-1)0.3μL、Taq DNA聚合酶(5U·μL-1)0.2μL、HPLC超純水11.1μL。PCR擴增程序為:94℃預變性4min;40個循環(huán):94℃變性45s;49.5-50.5℃
3、退火45s,72℃延伸2min;最后72℃延伸7min,4℃保存。利用上述已建立并優(yōu)化的ISSR-PCR反應體系,從100條ISSR引物中篩選出12條譜帶清晰、多態(tài)性好、反應穩(wěn)定的青海云杉有效引物。
運用篩選出的ISSR引物,對甘肅省張掖龍渠青海云杉無性系種子園的125個無性系的遺傳多樣性進行了分析。共發(fā)現(xiàn)186個ISSR多態(tài)性位點,多態(tài)性位點百分率為PPL=100.00%,平均有效等位基因數(shù)ne=1.2843;平均Nei's
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