基于SSRs的青海云杉無性系遺傳多樣性的遺傳關(guān)系的研究.pdf

1、青海云杉(Picea crassifolia Kom.)是松科(Pinaceae)云杉屬(Picea)的木本植物，常綠喬木，是青藏高原東北邊緣特有的森林樹種，也是西北地區(qū)重要的造林和城市綠化樹種，在祁連山乃至西北地區(qū)生態(tài)建設(shè)中發(fā)揮著不可替代的作用。目前國內(nèi)對青海云杉的種子萌發(fā)特性、表型變異、同工酶遺傳變異等研究已有文獻(xiàn)報(bào)道，但是基于SSR標(biāo)記的青海云杉的研究和應(yīng)用還鮮有報(bào)道。本研究主要包含兩部分的內(nèi)容：（1）青海云杉SSR-PCR反應(yīng)體

2、系的建立和優(yōu)化，以及引物的篩選；（2）基于SSRs的青海云杉無性系的遺傳多樣性和親緣關(guān)系研究。
　　采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素分析方法，建立并優(yōu)化了青海云杉的SSR-PCR反應(yīng)體系。結(jié)果顯示，青海云杉 SSR-PCR最適反應(yīng)體系為總體積為20.0μL,包括模板DNA(5-10 ng·μL-1)1.0μL、dNTP(10 mmol·L-1)0.45μL、正反向引物(10μmol·L-1)0.25μL、Mg2+(25 mmol·L-1)

3、2.0μL、Taq DNA聚合酶(5 U·μL-1)0.8μL、10×PCR緩沖液2.0μL、HPLC超純水13.25μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性3 min；44個(gè)循環(huán):94℃變性30 s；55-55.8℃退火30 s，72℃延伸1min；最后72℃延伸3 min，4℃保存。利用上述已建立并優(yōu)化的 SSR-PCR反應(yīng)體系，從60對已開發(fā)的挪威云杉（Picea abies Karst.）的SSR引物中篩選出來10對適用于青海云杉的

4、有效引物，這些引物譜帶清晰、多態(tài)性高、重復(fù)性好。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)還表明了 SSR標(biāo)記在云杉屬較好的種間通用性。
　　基于SSR標(biāo)記技術(shù)，對甘肅省張掖龍渠青海云杉無性系種子園的109個(gè)青海云杉無性系進(jìn)行了遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析。共發(fā)現(xiàn)230個(gè)SSR多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率PPLS=100.00％，有效等位基因數(shù)ne=14.76，Nei，s基因多樣性指數(shù)(期望雜合度) He=0.92，Shannon多態(tài)性信息指數(shù)I=2.77。 UPG