高強(qiáng)度聚焦超聲對(duì)大鼠淋巴管生物學(xué)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 本研究采用高強(qiáng)度聚焦超聲（HIFU）輻照大鼠富含淋巴管的腹股溝區(qū)，觀察輻照后不同時(shí)期，大鼠腹股溝淋巴管及周圍組織的生物學(xué)變化，為臨床應(yīng)用HIFU治療乳糜尿提供理論依據(jù)。 方法： 1.32只SD大鼠，按輻照后不同觀察時(shí)間隨機(jī)均分為4組，每組8只，每只大鼠右側(cè)腹股溝區(qū)為HIFU輻照側(cè)，左側(cè)為自身對(duì)照側(cè)。 2.用水合氯醛將大鼠腹腔注射麻醉后，行右側(cè)臀部及腹股溝區(qū)脫毛并清潔，然后將大鼠以仰臥位固定在置于超

2、聲波源內(nèi)自制的鐵架上，大鼠臀部須浸沒(méi)于脫氣水中，通過(guò)機(jī)載B超探頭將HIFU輻照的靶區(qū)定位于右側(cè)后肢與軀干連接處的腹股溝區(qū)。 3.HIFU輻照技術(shù)參數(shù)：焦域大小為3mm×3 mm×8mm，超聲波發(fā)射功率300W，單元發(fā)射時(shí)間0.15 s，占空時(shí)間0.18 s，單點(diǎn)發(fā)射次數(shù)為50次，總時(shí)間為15 min，一天一次，連續(xù)兩天。每次輻照后歸籠飼養(yǎng)，并于第二次輻照后24小時(shí)，72小時(shí)，7天，30天分別解剖雙側(cè)腹股溝區(qū)，肉眼觀察雙側(cè)腹股溝區(qū)

3、組織的變化，然后取后肢與軀干連接處的大小為1.0cm×0.8cm×0.4cm的腹股溝血管神經(jīng)束及周圍組織，并橫斷為相同大小的兩塊標(biāo)本，一塊作冰凍切片，一塊備用；同時(shí)取一塊脾臟組織，用于做免疫組化陽(yáng)性對(duì)照；三塊組織用生理鹽水紗布包好，放入-80℃超低溫冰箱保存，待統(tǒng)一切片。 4.所有冰凍標(biāo)本均連續(xù)切片，片厚5μm，共3張，1張行常規(guī)HE染色，1張行LYVE-1免疫組化染色，1張以PBS液代替-抗作為陰性對(duì)照。根據(jù)試劑說(shuō)明書，取已知

4、LYVE-1蛋白陽(yáng)性的大鼠脾臟切片染色作為陽(yáng)性對(duì)照。 5.HE染色及免疫組化染色觀察到所取標(biāo)本變化后，用備用的一塊標(biāo)本經(jīng)脫水、固定、切片、染色等步驟行透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果： 1.HIFU能夠透過(guò)皮膚靶向損傷淋巴管；適當(dāng)功率的HIFU輻照大鼠腹股溝淋巴管后，24小時(shí)及72小時(shí)實(shí)驗(yàn)側(cè)主要出現(xiàn)小血管充血、水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、淋巴管管腔變形、破裂等急性損傷性改變，7天及30天后實(shí)驗(yàn)側(cè)出現(xiàn)淋巴管數(shù)量減少、管腔

5、閉塞、管周瘢痕形成等現(xiàn)象，而同一部位的大動(dòng)、靜脈血管無(wú)明顯損傷性改變。 2.HIFU輻照后不同時(shí)間組，實(shí)驗(yàn)側(cè)淋巴管密度（LVD）均比自身對(duì)照側(cè)明顯減少。（P<0.01） 3.HIFU輻照后，隨時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)側(cè)LVD明顯減少（P<0.01）；HIFU輻照后7天，LVD減少趨于穩(wěn)定，此后隨時(shí)間延長(zhǎng)，LVD減少不顯著（P>0.05）。 結(jié)論： 高強(qiáng)度聚焦超聲能夠靶向損傷大鼠腹股溝淋巴管，使其出現(xiàn)淋巴管破裂、管腔