甘青烏頭生物堿的提取、分離和藥理活性研究.pdf

1、甘青烏頭為毛茛科烏頭屬植物唐古特烏頭Aconitum tanguticum(Maxim.) Stapf的干燥全草，為高山珍稀藥材，性涼味苦，具有清熱解毒，生肌燥濕的功效，其主要藥效成分為生物堿、苷類、揮發(fā)油等，其中生物堿具有廣泛的藥理活性。
　　采用90％乙醇對(duì)甘青烏頭進(jìn)行提取，得率為17.65％，并用不同極性有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取分離，用藥效學(xué)技術(shù)方法觀察測(cè)定甘青烏頭醇提物(EE)、石油醚萃取部分(PE)、乙酸乙酯萃取部分(EA)、氯

2、仿萃取部分(CH)、正丁醇萃取部分(BU)和水溶性部分(WA)對(duì)非特異性急、慢性炎癥反應(yīng)的影響，測(cè)定EE、PE、EA、CH、BU和WA對(duì)冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)和熱刺激痛閾的影響，比較分析其抗炎鎮(zhèn)痛作用;研究發(fā)現(xiàn)甘青烏頭具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用，醇提物具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛活性，初步篩選發(fā)現(xiàn)氯仿萃取部位是抗炎鎮(zhèn)痛的主要藥效物質(zhì)群，其他部位亦具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛活性，相對(duì)較弱。
　　根據(jù)甘青烏頭抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效物質(zhì)主要集中在醇提物的氯仿萃取部

3、位，并且發(fā)現(xiàn)含有生物堿，于是對(duì)甘青烏頭的總生物堿(TAA)進(jìn)行提取，并對(duì)TAA進(jìn)行定性定量分析和質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果顯示含生物堿（以烏頭堿計(jì)）為0.3323％，建立了比較穩(wěn)定的TAA含量測(cè)定方法，并采用Box-Behnken Design設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，以總生物堿和酯型生物堿含量為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，優(yōu)選TAA的提取工藝，獲得最佳工藝條件為提取溫度85℃，提取時(shí)間1.5h，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)90％，液料比15∶1，該工藝條件下TAA和酯型生物堿含

4、量分別為0.5360g/100g提取物和0.5030μg/mg總堿，且重現(xiàn)性好，可作為TAA提取的新工藝。
　　選擇兩種給藥途徑研冗TAA對(duì)小鼠灌胃和腹腔注射時(shí)的急性毒性，并測(cè)定LD50，初步評(píng)價(jià)其安全性，研究發(fā)現(xiàn)TAA灌胃給藥的LD50為0.7456g/kg，TAA腹腔注射給藥的LD50為0.3358g/kg，研究證實(shí)TAA經(jīng)灌胃和腹腔注射對(duì)小鼠均具有一定的急性毒性，初步判斷TAA急性中毒的靶器官為植物神經(jīng)系統(tǒng)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)，中

5、毒較快，持續(xù)時(shí)間較短。進(jìn)一步藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)TAA對(duì)非特異性急性炎癥反應(yīng)和慢性炎癥性組織增生具有明顯抑制作用，也具有一定的鎮(zhèn)痛作用。
　　采用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)建立大鼠急性肺損傷(ALI)模型，研究TAA對(duì)ALI模型大鼠的治療作用及作用機(jī)制，結(jié)果表明TAA通過(guò)其抗炎活性保護(hù)肺功能，且無(wú)顯著的肺組織細(xì)胞毒性，TAA對(duì)LPS誘導(dǎo)的ALI的保護(hù)作用是通過(guò)改善肺組織病理變化，抑制NF-κB活化，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管滲出等實(shí)現(xiàn)的，結(jié)果顯示

6、抑制前炎癥轉(zhuǎn)錄因子NF-κB以及炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6和IL-1β是主要的作用機(jī)制，初步表明TAA可作為急性肺損傷的有效治療物質(zhì)。
　　采用甲氨蝶呤誘導(dǎo)建立大鼠急性出血性腸炎(AHE)模型，研究TAA對(duì)AHE模型大鼠的治療作用及作用機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)TAA灌胃后能明顯改善AHE模型大鼠的一般狀況，改善組織形態(tài)，降低血清TNF-α和NO含量，上調(diào)回腸組織勻漿DAO、ICAM-1和MPO水平，表明TAA可有效保護(hù)腸黏膜的機(jī)械屏障，具

7、有良好的抗炎作用，初步表明TAA可作為急性腸炎的有效治療物質(zhì)。
　　選擇常見致病菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa），糞腸球菌（Enterococcus faecalis）和白色念珠菌(Candidaalbicans)為研究對(duì)象進(jìn)行抗菌試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)TAA對(duì)G+菌及G-菌抗菌活性較強(qiáng)，而對(duì)真菌在1.