亞硫酸鹽對肝細胞脂肪代謝相關因素的影響.pdf

1、目的:
　　 有文獻提示亞硫酸鈉具有致突變作用、脂質過氧化作用，一些在體實驗也顯示了亞硫酸鈉的肝損傷作用。本課題組在前期研究二氧化硫毒性時發(fā)現(xiàn)高濃度的二氧化硫可以引起肝細胞內(nèi)脂滴數(shù)量的明顯增加。為了進一步研究亞硫酸鈉對肝臟脂肪代謝的干擾作用，本課題以人正常二倍體HL-7702肝細胞作為模型，檢測食品添加劑亞硫酸鈉作用肝細胞以后，肝細胞內(nèi)與脂肪代謝密切相關的分子二酰甘油?；D移酶1(DGAT1)、載脂蛋白E(apoE)以及載脂蛋白

2、B100（apoB100）在轉錄以及翻譯水平的變化，以期探討亞硫酸鈉誘發(fā)肝細胞脂肪積累效應及作用途徑。
　　 方法:
　　 以正常人二倍體肝細胞株HL-7702為研究對象，經(jīng)不同濃度的Na2SO3及陽性對照1.0mmol/L的油酸作用12 h、24h、48 h以后，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清中載脂蛋白B100(apoB100)以及載脂蛋白E（apoE）的分泌情況;采用免疫沉淀法和Western

3、Blotting法檢測肝細胞內(nèi)DGAT1、apoB100和apoE的蛋白表達水平;采用定量聚合酶鏈反應法(Q-PCR)檢測肝細胞內(nèi)DGAT1、apoE以及apoB100 mRNA的表達水平。
　　 結果:
　　 1、Na2SO3對肝細胞內(nèi)DGAT1 mRNA表達水平的影響:染毒12 h，2.5 mmol/L、10.0mmol/LNa2SO3組肝細胞內(nèi)DGAT1 mRNA的表達水平明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意

4、義(P＜0.05);染毒24 h和48 h，僅10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內(nèi)DGAT1 mRNA的表達水平明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2、Na2SO3對肝細胞內(nèi)apoE mRNA表達水平的影響:染毒12h，2.5 mmol/L、10.0 mmol/LNa2SO3染毒組肝細胞內(nèi)apoE mRNA的表達水平明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);染毒

5、24 h，僅10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內(nèi)apoE mRNA的表達水平明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3、Na2SO3對肝細胞內(nèi)apoB100 mRNA表達水平的影響:染毒12 h，2.5 mmol/L、10.0 mmol/LNa2SO3染毒組肝細胞內(nèi)apoB100 mRNA的表達水平明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);染毒24 h和48 h后，

6、僅10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內(nèi)apoB100mRNA的表達水平明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4、Na2SO3對肝細胞內(nèi)DGAT1蛋白含量的影響:染毒12h和24 h，僅10.0 mmo/L Na2SO3處理組肝細胞內(nèi)DGAT1蛋白表達明顯升高，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);染毒肝細胞48 h后，10.0 mmo/L Na2SO3染毒組以及1.0

7、mmol/L油酸組肝細胞內(nèi)DGAT1蛋白表達均明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 5、Na2SO3對肝細胞內(nèi)apoE蛋白表達的影響:染毒12 h和24 h，各Na2SO3染毒組以及1.0 mmol/L油酸組肝細胞內(nèi)apoE的蛋白表達水平均明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;染毒48 h，各Na2SO3染毒組肝細胞內(nèi)apoE的蛋白表達水平明顯增加，與陰性對照組比較，差別有

8、統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 6、Na2SO3對肝細胞內(nèi)apoB100蛋白表達的影響:染毒12h、24 h、48 h，各Na2SO3染毒組肝細胞內(nèi)apoB100的蛋白表達水平均有明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 7、Na2SO3對肝細胞培養(yǎng)上清中apoB100含量的影響:染毒12h、24 h、48 h，各Na2SO3染毒組以及1.0 mmol/L油酸組肝細胞外培養(yǎng)上清中apoB1

9、00的表達量均有明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;
　　 8、Na2SO3對肝細胞培養(yǎng)上清中apoE含量的影響:染毒24 h后，10.0 mmol/L Na2SO3處理組以及1.0 mmol/L油酸組肝細胞培養(yǎng)上清中apoE的含量明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;染毒48 h后，0.1mmol/L以及10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞外培養(yǎng)上清中apoE的含量

10、有明顯增加，與陰性對照組比較，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 結論:
　　 1.一定劑量的Na2SO3可增加肝細胞內(nèi)DGAT1的含量，促進肝細胞內(nèi)甘油三酯的合成。
　　 2.一定劑量的Na2SO3可增加肝細胞內(nèi)apoE的蛋白表達量，但是對apoE的基因表達影響不明顯。表明apoE可能是通過受體途徑促進了肝細胞內(nèi)甘油三酯的分泌外排。
　　 3.一定劑量的Na2SO3可增加肝細胞apoB100的含量