杭州市正常水禽中主要血凝性病毒的檢測.pdf

1、采集臨床正常鴨子泄殖腔棉拭子經(jīng)0.22微米過濾除菌，并用先鋒Ⅵ作用后接種10日齡的雞胚，盲傳3代。對收獲的尿囊液進(jìn)行HA試驗(yàn)，將具有血凝性的尿囊液與ND標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、禽流感H9和H5標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、雞減蛋綜合癥標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)鑒定，結(jié)果分離到了5株新城疫病毒和1株H5禽流感病毒。 其中分離到NDV的1號分離株和2號分離株的第2代、第3代雞胚全身出血，以頭部、足趾、翅膀出血尤為明顯。H<,5>亞型禽流感病毒致死胚也出現(xiàn)嚴(yán)

2、重的全身出血癥狀，雞胚死亡時間在24～60小時左右。 本研究根據(jù)AIV保守片段NP片段進(jìn)行引物設(shè)計，以確定A型流感病毒的存在。在此基礎(chǔ)上，選擇禽流感病毒亞型決定片段HA基因?yàn)槟康幕?，設(shè)計8節(jié)段基因共同引物及HA基因特異性引物，以進(jìn)一步鑒定其亞型及分析其致病性兩次RT-PCR擴(kuò)增及HA全基因測序分析，提高了檢測的敏感性，且避開了由于HA基因在裂解位點(diǎn)的突變而導(dǎo)致的PCR的失敗。 對分離病毒的尿囊液進(jìn)行AIV的RT-PCR