應(yīng)用急性病毒性壞死病毒(AVNV)分子檢測技術(shù)對其主要宿主的檢測與分析.pdf

1、櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)是我國北方沿海養(yǎng)殖的主要貝類品種之一。“急性病毒性壞死病毒”(AcuteViralNecrosisVirus;AVNV)已被證實為是一種對養(yǎng)殖櫛孔扇貝危害極大的病原體。本文應(yīng)用已建立的AVNV核酸檢測方法,對養(yǎng)殖扇貝、養(yǎng)殖海區(qū)浮游生物、養(yǎng)殖籠附著污損生物以及全國9省21個海區(qū)采集到的養(yǎng)殖貝類樣品進行檢測與分析,以探討AVNV的主要宿主分布以及可能的傳播途徑。
　　 本文應(yīng)用AVNV環(huán)介導(dǎo)等

2、溫擴增法(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)對兩個不同櫛孔扇貝養(yǎng)殖海區(qū)的扇貝進行連續(xù)周年檢測,研究AVNV在扇貝體內(nèi)的感染增殖規(guī)律以及探討綜合生態(tài)調(diào)控技術(shù)對扇貝流行病控制效果。檢測結(jié)果表明,08、09兩年青島流清河養(yǎng)殖海區(qū)扇貝樣品在夏季大規(guī)模死亡季節(jié)均能檢測到較高的AVNV攜帶率,其中08年5月-09年4月野生苗種扇貝8月份陽性率最高,達到75％,全年平均攜帶率為35％;09年1月-12

3、月三種扇貝苗種蓬萊紅、人工育苗和野生苗,7月份AVNV攜帶率最高分別為20％、70％和80％,扇貝攜帶AVNV的陽性率與扇貝大規(guī)模死亡流行病學(xué)的特征具有正相關(guān)性,而高溫(7月和8月份海溫度水平均23℃以上)可能是導(dǎo)致AVNV感染扇貝死亡的重要環(huán)境脅迫因子;桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)屬于貝藻混養(yǎng)海區(qū),由于部分苗種來源問題,桑溝灣檢測到AVNV攜帶率最高時間為4月份扇貝分苗掛養(yǎng)時,蓬萊紅、人工育苗和野生苗AVNV攜帶率分別為50％、60％和0,野生

4、苗5月、6月AVNV攜帶率最高均為30％。09年流清河扇貝養(yǎng)殖場蓬萊紅、人工育苗、野生苗存活率分別為39.1％、40.7％、45.3％;桑溝灣扇貝養(yǎng)殖場蓬萊紅、人工育苗、野生苗存活率分別為96.8％、89.2％、90％,表明貝藻混養(yǎng)的養(yǎng)殖模式較單一養(yǎng)殖模式能利用大型藻類對扇貝養(yǎng)殖環(huán)境的生態(tài)調(diào)控,可以顯著地降低病原水平,降低扇貝發(fā)病率。
　　 對09年對青島流清河與榮成桑溝灣兩個不同的扇貝養(yǎng)殖海區(qū)浮游生物采樣調(diào)查,研究浮游生物是否

5、能攜帶AVNV及其變化情況。利用實時熒光定量PCR(Real-timefluorescentquantitativePCR,FQ-PCR)技術(shù)對不同粒徑的浮游生物攜帶AVNV進行定量檢測,結(jié)果表明兩個扇貝養(yǎng)殖海區(qū)均檢測到AVNV陽性樣品存在,而且不同粒徑的浮游生物攜帶AVNV量有差異,粒徑小于200目的浮游生物攜帶AVNV的量最大,達到9.45×106拷貝/mg總DNA,粒徑60目-200目的之間浮游生物次之,粒徑大于60目的浮游生物攜

6、帶量最少,僅為5.81×104拷貝/mg總DNA。在上述兩個扇貝養(yǎng)殖海區(qū),均在8月份檢測到浮游生物攜帶AVNV,與櫛孔扇貝夏季大規(guī)模死亡現(xiàn)象在時間上吻合。實驗結(jié)果表明:浮游生物可以攜帶AVNV,可能在AVNV的流行和傳播中起到傳播媒介的作用。
　　 對09年兩個不同的扇貝養(yǎng)殖海區(qū)養(yǎng)殖扇貝扇貝籠上經(jīng)常出現(xiàn)的幾種附著污損生物檢測其能否攜帶AVNV,是否是AVNV的潛在宿主,探討附著污損生物在AVNV傳播過程中起到有什么作用。兩個海區(qū)

7、中長牡蠣、紫貽貝、柄海鞘和麥稈蟲樣品中均檢測到AVNV陽性的存在,青島流清河扇貝養(yǎng)殖海區(qū)的東方縫棲蛤未檢測到AVNV陽性樣品存在,表明長牡蠣、紫貽貝、柄海鞘和麥稈蟲可以攜帶AVNV,是AVNV的宿主,東方縫棲蛤未檢測到AVNV,可能不是AVNV的宿主。
　　 自06年11月至09年11月從中國沿海9個省21個海區(qū)共采集38批586份樣品,包括20種主要養(yǎng)殖貝類,其中雙殼綱貝類16種,腹足綱4種。檢測這些貝類樣品攜帶AVNV的攜帶