魚類病毒性神經(jīng)壞死病毒的分離和部分特性研究.pdf

1、魚類病毒性神經(jīng)壞死病(Viralnervousnecrosis，簡稱VNN)又稱病毒性腦病和視網(wǎng)膜病(Viralencephalopathyandretinopathy，VER)，是由魚類病毒性神經(jīng)壞死病毒(Viralnervousnecrosisvirus，簡稱VNNV，屬于乙型野田村病毒屬)引起的一種新的傳染性疾病。是世界范圍的一種魚類流行性傳染病，該病最早于1985年報道于日本，現(xiàn)已遍及非洲外的所有地方。該病臨床上主要以魚苗出現(xiàn)神

2、經(jīng)異常為特征，表現(xiàn)為不正常游泳：螺旋狀游動、在水中打轉、腹部向上浮于水面；組織病理以患病魚中樞神經(jīng)系統(tǒng)和視網(wǎng)膜中間層出現(xiàn)空泡為特征。中國臺灣和廣州分別從1997年和2001年開始報道此病，目前已對我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重危害。國內關于VNNV的報道集中在病理切片和核酸序列分析上，而關于此病毒在條紋月醴細胞系(stripedsnakehead，SSN1)分離培養(yǎng)及理化特性方面的報道較少。 從福建廈門收集發(fā)病青斑病料經(jīng)處理接種SSN1

3、細胞，設定不同溫度增值病毒。通過制備病理切片、觀察細胞病變(cytopathiceffects，CPE)、PCR擴增VNNV部分核酸片段和電鏡觀察來確定分離物是否為VNNV。結果通過病理切片可以在病魚視網(wǎng)膜中看到大量空泡化現(xiàn)象，接種的SSN1細胞在25℃培養(yǎng)2-3天表現(xiàn)出CPE，PCR檢測結果為VNNV核酸陽性，電鏡觀察細胞切片顯示有大量病毒粒子排列在感染的SSN1細胞質中，負染可以看到其為直徑25-30nm的二十面體，無囊膜。綜上表明

4、所分離的為VNNV。隨后對其一些特性進行研究。該病毒在SSN1細胞中25℃時滴度可以達到105.1/0.1mL，石斑魚吻端細胞系(grouperproboscis，GP)、鯉魚上皮瘤細胞系(epithelimapopuasumcuprini，EPC)、肥頭鯉細胞系(pimephalespromelas，F(xiàn)HM)在28℃、25℃、20℃時對該病毒都沒有CPE，且PCR檢測VNNV核酸為陰性。病毒經(jīng)55℃30min、pH=3和pn=11各1

5、h處理后下降2個滴度，經(jīng)氯仿處理后滴度不變。以上說明GP、EPC、FHM這些細胞對該病毒都不敏感；該病毒對熱(55℃30min)和酸堿(pH=3和pH=11)都比較敏感；對氯仿不敏感說明病毒沒有囊膜，符合VNNV的形態(tài)特征。 此研究從VNNV培養(yǎng)溫度及SSN1細胞培養(yǎng)環(huán)境等方面為制定細胞分離培養(yǎng)VNNV規(guī)程提供了一定的數(shù)據(jù)依據(jù)，具有一定的診斷意義。另外這是在我國首次借助SSN1細胞報道了VNNV的理化特性，為養(yǎng)殖場環(huán)境控制提供了