櫛孔扇貝急性病毒性壞死癥病毒基因克隆及核酸診斷技術(shù)的建立.pdf_第1頁(yè)
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1、自1997年以來(lái)山東沿海暴發(fā)櫛孔扇貝(Chlamys farreri)大規(guī)模死亡現(xiàn)象,給中國(guó)貝類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查、病理學(xué)分析和人工感染實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)是由櫛孔扇貝急性病毒性壞死癥病毒(AVNV)造成的.該研究利用差速離心和蔗糖密度梯度離心分離純化AVNV后,用蛋白酶K裂解法抽提AVNV核酸,并對(duì)AVNV核酸特性進(jìn)行了基本分析,結(jié)果顯示AVNV是單鏈不分節(jié)段的RNA病毒.采用隨機(jī)引物和Oligo(dT)雙引物法,用Su

2、perScriptII反轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA,并克隆到pUC118質(zhì)粒上,構(gòu)建了AVNV核酸的部分cDNA文庫(kù),通過(guò)藍(lán)白斑顯色、PCR反應(yīng)和酶切分析相結(jié)合篩選陽(yáng)性重組子,測(cè)定了重組cDNA克隆的部分序列并進(jìn)行了序列分析,最終從中篩選出23＃、52＃特異重組cDNA克隆.該研究所建立的AVNV的RT-PCR檢測(cè)方法和PCR法制備DIG標(biāo)記探針的斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法是2種快速、靈敏和特異的檢測(cè)AVNV的方法,發(fā)展和完善這2種技術(shù)對(duì)櫛孔扇貝急性病毒

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