法舒地爾對(duì)PDGF誘導(dǎo)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:體外培養(yǎng)人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC),用PDGF誘導(dǎo)增殖,研究法舒地爾對(duì)PDGF誘導(dǎo)增殖的HPASMC的抑制作用、機(jī)制及其對(duì)HPASMC的促凋亡作用,為臨床應(yīng)用法舒地爾治療肺動(dòng)脈高壓提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 1.通過形態(tài)學(xué)、MTT、流式細(xì)胞儀、Western blot等方法研究PDGF對(duì)HPASMC的促增殖作用,及對(duì)Rho A/ROCK信號(hào)通路、ERK信號(hào)通路及p27kip1的影響；

2、　　 2.通過MTT、流式細(xì)胞儀、Western blot、TUNEL等方法研究法舒地爾對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HPASMC增殖的抑制作用、對(duì)Rho A/ROCK信號(hào)通路、ERK信號(hào)通路及p27kip1的影響及對(duì)HPASMC的促凋亡作用。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.從形態(tài)學(xué)上觀察法舒地爾可以抑制PDGF誘導(dǎo)的HPASMC增殖；用MTT檢測,在培養(yǎng)24 h后,PDGF能顯著誘導(dǎo)HPASMC增殖,法舒地爾預(yù)處理則能顯著抑制PDG

3、F的促HPASMC增殖作用,并呈濃度依賴性；Western blot檢測,PDGF作用24 h后能顯著上調(diào)PCNA表達(dá),法舒地爾預(yù)處理則能顯著下調(diào)PDGF誘導(dǎo)的PCNA高表達(dá)。
　　 2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,在培養(yǎng)24 h后,PDGF能顯著誘導(dǎo)正常HPASMC由G1期向S期轉(zhuǎn)化；法舒地爾預(yù)處理則對(duì)PDGF誘導(dǎo)增殖的HPASMC有G1期阻滯作用,這種阻滯作用呈濃度依賴性。
　　 3.用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測法舒地爾對(duì)HPASM

4、C的細(xì)胞毒性,結(jié)果顯示不同濃度的法舒地爾(0、10、30、50、100 umol/l)作用24 h后,HPASMC的細(xì)胞存活率與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4.用Western-blot法檢測發(fā)現(xiàn)PDGF作用后能增加ROCK的酶活性,并在15 min達(dá)到最高峰；用法舒地爾預(yù)處理可以顯著降低PDGF誘導(dǎo)的ROCK酶活性,并呈濃度依賴性。
　　 5.用Western—blot法檢測ERK蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)PDGF作用后能顯

5、著增強(qiáng)ERK活性,法舒地爾預(yù)處理則能顯著抑制PDGF誘導(dǎo)的ERK高表達(dá)。
　　 6.用Western-blot法檢測p27Kip1蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)PDGF作用后能顯著下調(diào)p27Kip1蛋白的表達(dá),法舒地爾預(yù)處理則可以顯著上調(diào)PDGF作用后p27Kip1的低表達(dá)。
　　 7.用流式細(xì)胞儀和TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)法舒地爾預(yù)處理后,HPASMC的細(xì)胞凋亡率無顯著性變化。
　　 結(jié)論:
　　 PDGF對(duì)體外培養(yǎng)的H