p53促凋亡刺激蛋白在非小細胞肺癌中表達的研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文p53促凋亡刺激蛋白在非小細胞肺癌中表達的研究姓名：李士軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：施廣霞20090601ASPP家族的表達和化療藥物作用非小細胞肺癌細胞株后ASPP表達的調(diào)節(jié)，以及非小細胞肺癌癌組織、癌旁組織，正常肺組織中p53不同狀態(tài)下ASPP表達的變化，非小細胞肺癌患者化療過程中監(jiān)測外周血ASPP表達的臨床意義。通過本研究探討ASPP的表達與非小細胞肺癌發(fā)生的相關(guān)性，以及化療藥物對

2、ASPP表達的影響，為非小細胞肺癌的診斷和治療尋找新的分子靶點。材料和方法細胞標本選取肺鱗癌細胞株NCIH157，p53突變型；肺腺癌細胞株A549p53野生型。組織標本選自2007年2月至l2月本院的非小細胞肺癌手術(shù)切除癌組織、癌旁組織(癌組織旁12cm內(nèi)組織)、肺組織(癌組織邊緣外2cm)各37例。其中男性患者21例，女性患者16例，平均年齡61歲，年齡分布于3875歲；診斷為肺腺癌l5例，鱗癌為l6例，其它非小細胞巨細胞癌2例和肺

3、腺癌鱗癌分化4例。血液標本來自上述NSCLC患者，收集化療前后的血液標本，其中追蹤調(diào)查18例病例。對照組為健康體檢者，男性19例，女性18例，平均年齡51歲，年齡分布4471歲。1ASPPl標準品選取通過轉(zhuǎn)錄得到的高濃度質(zhì)粒，ASPP2的標準品通過培養(yǎng)HL60細胞，提取RNA轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA，根據(jù)已知序列設(shè)計特異性引物，建立檢測p53凋亡刺激蛋白ASPP1和ASPP2mRNA表達的實時熒光定量RTPCR方法；2應(yīng)用實時熒光定量RTPC

4、R方法檢測肺癌組織、癌旁組織、正常肺組織ASPP表達，免疫組化檢測肺癌組織p53表達狀態(tài)；3選擇p53遺傳背景不同的非小細胞肺癌細胞株NCiH157(突變型)和A549(野生型)進行培養(yǎng)，用化療藥物順鉑(cisplatine)處理，采用MTT法篩選化療藥物敏感細胞株，利用透射電鏡檢查NSCLC細胞株的形態(tài)學(xué)改變。應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測非小細胞肺癌細胞株ASPP的表達，比較不同細胞株之間和藥物處理后ASPP表達的差異；4檢測非小細胞肺