凋亡相關(guān)基因P53、Fas-Fasl在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義研究.pdf

1、1.背景及目的
　　 肺部惡性腫瘤是目前臨床較多見的危害人類生命健康的惡性腫瘤之一，近年來肺癌的發(fā)病率逐年增高，發(fā)病人群越來越年輕化。肺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，包括多種基因、多種因素的共同作用，包括原癌基因被激活、抑癌基因失活、凋亡相關(guān)基因的異常表達(dá)等。
　　 P53基因是一種抑癌基因，其可以通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、穩(wěn)定基因組等方式，從而抑制腫瘤細(xì)胞的周期，抑制腫瘤細(xì)胞無限惡性增殖，達(dá)到抑制癌基因增殖，腫瘤發(fā)展的作用。突變

2、型P53和野生型P53是P53基因的常見兩種類型，突變型P53則不同于野生型P53，它是一種促癌基因，與可能發(fā)生癌變或已經(jīng)發(fā)生癌變的細(xì)胞結(jié)合，不能抑制腫瘤細(xì)胞的周期。因此與腫瘤的預(yù)后差，轉(zhuǎn)移率高，化療耐藥，放療不敏感有關(guān)。Fasl是腫瘤壞死因子家族的三聚體跨膜蛋白，F(xiàn)asl與其受體Fas結(jié)合而誘導(dǎo)攜帶Fas的細(xì)胞凋亡。最新研究表明Fas/Fasl表達(dá)異常是腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫攻擊的新機(jī)制。本實驗通過對凋亡相關(guān)基因P53、Fas/Fasl

3、在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，以及這些基因之間的相關(guān)性，為NSCLC的早期診斷、治療提供實驗依據(jù)。
　　 2.對象與方法
　　 2.1.研究對象
　　 實驗組:鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2011年～2012年間由胸外科手術(shù)切除標(biāo)本，共60例，均被病理學(xué)證實為非小細(xì)胞肺癌組織。
　　 對照組:已經(jīng)被病理學(xué)證實為非小細(xì)胞肺癌的癌旁正常組織（即距腫瘤邊緣超過3cm），共20例。
　　 所選非小細(xì)胞肺癌的患者均

4、為首次發(fā)現(xiàn)，之前未接受任何方式的有關(guān)抗癌治療。
　　 2.2.實驗方法
　　 本實驗通過運(yùn)用免疫組化（S-P法）檢測P53、Fas、Fasl在非小細(xì)胞肺癌（肺腺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌）和癌旁的正常組織中的表達(dá)。凋亡細(xì)胞檢測則用TUNEL法。
　　 2.3.判定標(biāo)準(zhǔn)
　　 2.3.1.P53、Fas、Fasl的陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
　　 在400倍光鏡下隨機(jī)選取5個視野計數(shù)，計數(shù)方法為:100個細(xì)胞/每視野×

5、5=500個細(xì)胞。細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒表示P53陽性表達(dá)，細(xì)胞漿/細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒表示Fas表達(dá)陽性，細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒則是Fasl表達(dá)陽性。判定因素:顯色強(qiáng)度分值+陽性細(xì)胞數(shù)分值，①細(xì)胞顯色程度分值設(shè)置方法:無棕黃色顆粒，顏色與背景無明顯區(qū)別記為0分;有棕黃色顆粒，顏色高于背景底色記為1分;有染色較清晰的棕黃色顆粒，介于1分與3分之間記為2分;深棕黃色顆粒多，顏色明顯比背景顏色強(qiáng)的記為3分。②陽性細(xì)胞比例分值設(shè)置方法:0分

6、:無陽性細(xì)胞;1分:陽性細(xì)胞比例小于10％;2分:陽性細(xì)胞比例介于10％～50％;3分:陽性細(xì)胞比例大于50％。①+②結(jié)果所得分值綜合判斷陽性表達(dá)，最后得分超過或等于4分為表達(dá)陽性，低于4分為表達(dá)陰性。
　　 2.3.2.判定凋亡細(xì)胞的陽性以及凋亡指數(shù)(AI)
　　 通過采用TUNEL法檢測凋亡細(xì)胞，凋亡細(xì)胞陽性就是檢測出來的那些細(xì)胞核被染成棕黃色的細(xì)胞。凋亡指數(shù)(AI)的計算方法:在400倍視野下任意選取10個視野，計

7、數(shù)所測的凋亡細(xì)胞，凋亡指數(shù)=凋亡細(xì)胞總數(shù)/計數(shù)總細(xì)胞數(shù)×100％。
　　 2.4.統(tǒng)計學(xué)處理
　　 分析本實驗所得出的數(shù)據(jù)均使用的統(tǒng)計軟件為SPSS17.0。所運(yùn)用到的統(tǒng)計方法有:①卡方檢驗，②卡方檢驗的連續(xù)性校正（理論頻數(shù)＜5），③配對資料的關(guān)聯(lián)性分析（spearman分析），④直線相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。
　　 3.結(jié)果
　　 3.1.P53在非小細(xì)胞肺癌組織的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系<

8、br>　　 P53陽性表達(dá)表現(xiàn)為細(xì)胞核染成棕黃色，P53在60例NSCLC中表達(dá)的陽性率為58.3％(35/60)，P53在正常肺組織中不表達(dá)(0/20)，兩者差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=20.741，P=0.000)。P53在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的表達(dá)的陽性率為70.6％，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的表達(dá)的陽性率為42.3％，兩者差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=4.848，P=0.028)。P53的表達(dá)與NSCLC患者的自身因素中的性別、年齡、是否吸

9、煙，以及腫瘤因素的腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、病理分型、有無胸膜轉(zhuǎn)移無關(guān)。
　　 3.2.Fas在非小細(xì)胞肺癌組織的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　 Fas陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞漿。Fas在60例NSCLC組織中表達(dá)的陽性率為46.7％(28/60)，在20例正常組織的表達(dá)的陽性率為100％(20/20)，兩者差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=14.359，P=0.000)。Fas在NSCLC的高分化組中的表達(dá)的

10、陽性率為78.6％，在中、低分化組表達(dá)的陽性率為37.0％，兩者差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=7.468，P=0.006)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的表達(dá)的陽性率為57.5％，Ⅲ、Ⅳ期的表達(dá)的陽性率為25％，兩者差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=5.658，P=0.017)。Fas的表達(dá)與NSCLC患者自身因素中的年齡、性別、是否吸煙，以及腫瘤因素中的腫瘤直徑、病理分型、伴或不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及有無胸膜轉(zhuǎn)移無關(guān)。
　　 3.3.Fasl在非小細(xì)

11、胞肺癌組織的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　 Fasl陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿。Fasl在60例NSCLC組織中表達(dá)的陽性率為68.23％(41/60)，在20例正常組織中表達(dá)的陽性率為15％(3/20)，兩者差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=17.239，P=0.000)。Fasl在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)的陽性率為85.3％，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的表達(dá)陽性率為53.8％，兩者差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=10.431，P=0.001)。

12、Fasl的表達(dá)與NSCLC患者自身因素中的年齡、性別、是否吸煙，以及腫瘤因素中的腫瘤直徑、病理分型、TNM分期、分化程度、有無胸膜轉(zhuǎn)移無關(guān)。
　　 3.4.NSCLC組織中P53、Fas、Fasl表達(dá)的相關(guān)性分析
　　 應(yīng)用配對資料的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果示:P53和Fas在NSCLC組織中的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r=-0.361，x2=7.837，P=0.005)。P53和Fasl在NSCLC組織中的表達(dá)存在正相關(guān)(r=0.297，

13、x2=5.284，P=0.022)。Fas和Fasl在NSCLC組織中的表達(dá)不存在相關(guān)性(r=-0.225，x2=3.038，P=0.082)。
　　 3.5P53、Fas、Fasl與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系分析
　　 采用直線相關(guān)分析結(jié)果示:P53與凋亡指數(shù)（AI）成負(fù)相關(guān)(r=-0.684，P=0.000)，F(xiàn)asl與凋亡指數(shù)(AI)成負(fù)相關(guān)（r=-0.702，P=0.000）。Fas與凋亡指數(shù)(AI)成正相關(guān)(r=0.7