濕熱挾瘀證慢性非細(xì)菌性前列腺炎特征性炎癥因子篩選及清熱利濕化瘀方的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、研究目的：
　　 1）探討慢性非細(xì)菌性前列腺炎的中醫(yī)基本證型、病機(jī)特點(diǎn)及演變規(guī)律；
　　 2）篩選基本證型的慢性非細(xì)菌性前列腺炎特征性炎癥因子；
　　 3）探討特征性炎癥因子在慢性非細(xì)菌性前列腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用；
　　 4）探討根據(jù)慢性非細(xì)菌性前列腺炎基本病機(jī)擬方的中藥復(fù)方抑制炎癥反應(yīng)的分子機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 1）隨機(jī)調(diào)查湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)外科門診的慢性前列腺炎患

2、者1083 例，填寫《慢性前列腺炎中醫(yī)證型分布調(diào)查表》
　　 并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，了解慢性前列腺炎的中醫(yī)證型分布、兼證特點(diǎn)，中醫(yī)證候與西醫(yī)診斷分型、病程、年齡的關(guān)系，中醫(yī)證型的主要癥狀、體征特點(diǎn)以及慢性非細(xì)菌性前列腺炎的中醫(yī)基本證型。
　　 2）選取基本證型的慢性非細(xì)菌性前列腺炎患者38例，健康對(duì)照組21例，收集前列腺液，提取總蛋白，采用抗體芯片技術(shù)檢測(cè)前列腺液中40 種主要炎癥因子的表達(dá)，比對(duì)分析后初篩出差異表達(dá)蛋白

3、點(diǎn)。
　　 3）采用Western-blot方法驗(yàn)證初篩出差異表達(dá)蛋白，了解慢性非細(xì)菌性前列腺炎患者炎癥因子網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控特點(diǎn)，明確慢性非細(xì)菌性前列腺炎的特征性炎癥因子。
　　 4）應(yīng)用大鼠前列腺蛋白提純液輔以免疫佐劑制備實(shí)驗(yàn)性慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型，并給予中藥復(fù)方灌胃，中藥復(fù)方根據(jù)慢性非細(xì)菌性前列腺炎基本病機(jī)擬方，消炎痛為西藥對(duì)照，采用HE 染色、免疫組織化學(xué)、熒光定量RT-PCR 等方法檢測(cè)中藥復(fù)方對(duì)模型大鼠前列腺

4、組織的病理結(jié)構(gòu)影響，以及篩選出的特征性炎癥因子mRNA 及蛋白表達(dá)的影響，探討中藥復(fù)方通過抑制炎癥反應(yīng)發(fā)揮治療效果的分子機(jī)制。
　　 研究結(jié)果：
　　 1）1083例慢性前列腺炎患者中醫(yī)證型分布調(diào)查結(jié)果顯示，出現(xiàn)濕熱蘊(yùn)阻、氣滯血瘀兩證的比例高達(dá)91.51％與84.30％以上。但出現(xiàn)單一兩證的比例則比較小，只有3.88％與2.22％，臨床大多表現(xiàn)為兼夾證。在所有兼夾證中，以濕熱蘊(yùn)阻+氣滯血瘀證最高，達(dá)56.79％，其次為濕

5、熱蘊(yùn)阻+氣滯血瘀+腎陽不足，為14.59％，這兩類證占所有證型的70％以上。單一證如濕熱蘊(yùn)阻證多出現(xiàn)在<6 個(gè)月的患者中，病程>6 個(gè)月以上的患者出現(xiàn)單一證的比例極少，而且隨病程延長(zhǎng)，出現(xiàn)腎虛的比例也相應(yīng)增多。在年齡結(jié)構(gòu)分布中，30歲以下出現(xiàn)腎虛的兼證少，30歲以上者出現(xiàn)腎虛兼證的多。尿頻、會(huì)陰部等局部墜脹或疼痛、尿后滴瀝是慢性前列腺炎特征性證候。慢性前列腺炎患者以CAP/CPPS（Ⅲ型）為多，占總數(shù)的91.23％，以濕熱蘊(yùn)阻證+氣滯血

6、瘀證為主，其次為濕熱蘊(yùn)阻證+氣滯血瘀證+腎陽不足證；濕熱挾瘀證是慢性非細(xì)菌性前列腺炎的中醫(yī)基本證型。
　　 2）濕熱挾瘀證慢性非細(xì)菌性前列腺炎患者前列腺液抗體芯片檢測(cè)結(jié)果為：表達(dá)增強(qiáng)>1.5 倍的細(xì)胞因子有白介素1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-11（IL-11）、可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅱ（sTNF RⅡ）、血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB （PDGF-BB）、單核細(xì)胞趨化因子1(MCP-1)、單核細(xì)胞趨化因子2（MC

7、P-2）七種炎癥因子；聚類分析結(jié)果顯示，PDGF-BB、MCP-1最后聚合為一類，IL-1β、IL-11、IL-6、MCP-2、s TNF RⅡ?yàn)橐活?，其他炎癥因子為一類，差異有統(tǒng)計(jì)性意義（P<0.01）。IL-1β、IL-6、MCP-1、MCP-2、PDGF-BB 為促炎癥因子，IL-11、s TNF RⅡ?yàn)榭寡装Y因子。促炎癥因子的表達(dá)明顯高于抗炎癥因子表達(dá)。
　　 3）經(jīng)Western blot 驗(yàn)證， IL-1β、IL-6

8、、MCP-1、PDGF-BB、sTNF RⅡ五種細(xì)胞因子在慢性非細(xì)菌性前列腺炎患者中表達(dá)增高，其中MCP-1、PDGF-BB、sTNF RⅡ三種細(xì)胞因子為未報(bào)道過新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子。TNF-α、IL-1β、IL-6 是慢性非細(xì)菌性前列腺炎發(fā)病機(jī)制中的直接引起炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子，MCP-1 的趨化作用進(jìn)一步加重了炎癥反應(yīng)過程，炎癥反應(yīng)的刺激導(dǎo)致吞噬細(xì)胞或組織細(xì)胞大量分泌PDGF-BB 促進(jìn)腺上皮細(xì)胞增殖，進(jìn)一步導(dǎo)致病情的加重。保護(hù)性抗炎癥因

9、子sTNF RⅡ的增高可抑制TNF-α的生物學(xué)效應(yīng)。
　　 4）清熱利濕化瘀方（三草安前湯）可顯著降低慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型大鼠炎癥因子IL-1β、IL-6、炎癥趨化因子MCP-1、炎癥相關(guān)生長(zhǎng)因子PDGF-BB 的mRNA 及蛋白表達(dá)水平（P<0.01），且大、中劑量組作用要優(yōu)于小劑量組（P<0.05）；對(duì)照組消炎痛對(duì)IL-1β、IL-6 的mRNA 及蛋白表達(dá)水平改善明顯，但對(duì)炎癥趨化因子MCP-1、炎癥相關(guān)生長(zhǎng)因子PDG

10、F-BB 的mRNA 及蛋白表達(dá)水平效果要遠(yuǎn)低于三草安前湯（P<0.01）；可通過TNF-TNFR-sTNFR體系反饋調(diào)節(jié)間接起到降低TNFRⅡ、sTNF RⅡ表達(dá)的作用。
　　 研究結(jié)論：
　　 1）濕熱、瘀血是導(dǎo)致慢性前列腺炎的主要發(fā)病因素；腎虛在慢性前列腺炎發(fā)病中多由久病傷腎所致，是病情進(jìn)展遷延的結(jié)果，可進(jìn)一步導(dǎo)致疾病纏綿難愈。
　　 2）慢性非細(xì)菌性前列腺炎的基本病機(jī)為濕熱挾瘀，濕熱挾瘀證是其最多見臨床基

11、本證型。
　　 3）IL-1β、IL-6、MCP-1、PDGF-BB、sTNF RⅡ?yàn)闈駸釖娥鲎C慢性非細(xì)菌性前列腺炎的五種特征性炎癥因子。慢性非細(xì)菌性前列腺炎處于以促炎因子占優(yōu)勢(shì)的免疫炎癥反應(yīng)“弱平衡”狀態(tài)中。
　　 4）清熱利濕化瘀是治療慢性非細(xì)菌性前列腺炎的基本大法，據(jù)此擬方的三草安前湯通過直接調(diào)控TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、PDGF-BB 以及間接調(diào)控TNFR、sTNFR，從而抑制炎癥反應(yīng)，阻止前