原子力顯微鏡對(duì)人乳腺上皮細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)的觀(guān)察.pdf

1、目的：在原子力顯微鏡下觀(guān)察正常乳腺、乳腺增生癥及乳腺癌上皮細(xì)胞膜的表面結(jié)構(gòu)，探討乳腺癌形成的機(jī)制。測(cè)量分析活體乳腺上皮細(xì)胞膜表面蛋白的分布情況，從而在一定程度上指導(dǎo)早期乳腺癌的診斷。 方法：獲取手術(shù)切除的人活體乳腺增生癥組織、乳腺癌組織、正常乳腺組織各15例，制成細(xì)胞印片，所有標(biāo)本術(shù)前均未行任何抗腫瘤治療。將樣本用2％甲醛溶液固定，用蒸餾水反復(fù)沖洗，置于潔凈空間晾干。 樣本晾干后置于A(yíng)FM載物臺(tái)上，利用Nikon倒置顯微

2、鏡觀(guān)察細(xì)胞的分散情況，選擇細(xì)胞進(jìn)行掃描。選擇Tapping模式，調(diào)整激光與針尖重合，并將探測(cè)器的激光光斑置于中心圓點(diǎn)。在操作軟件中進(jìn)行自動(dòng)調(diào)頻，調(diào)節(jié)探針，直至針尖接觸到樣本開(kāi)始掃描。每個(gè)病例掃描10個(gè)細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞分散掃描10個(gè)區(qū)域，掃描范圍為30μm～1μm，掃描頻率為0.5Hz～2Hz。 利用AFM圖像分析軟件，對(duì)掃描所得細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)的圖像進(jìn)行分析獲得數(shù)據(jù)平均粗糙度(Ra)、峰值(Peakcount)、高度差(Rp-v)，

3、并對(duì)其進(jìn)行Kruskal Wallis檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： AFM下觀(guān)察到三組細(xì)胞膜表面形態(tài)結(jié)構(gòu)：正常乳腺細(xì)胞膜表面相對(duì)平滑，突起較少，在膜上分布稀疏。乳腺增生癥細(xì)胞膜表面相對(duì)粗糙，突起較多，在膜上分布較密集。乳腺癌細(xì)胞膜表面更加粗糙，突起在膜上分布密集且有融合趨勢(shì)，表現(xiàn)為凸起直徑的增加。利用AFM圖像分析軟件對(duì)正常乳腺組、乳腺增生組、乳腺癌組細(xì)胞膜表面Ra、Peak Count和Rp-v進(jìn)行測(cè)量，每組15

4、0個(gè)細(xì)胞，用SPSS13.0對(duì)所得參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(x±s)。1 正常乳腺組上皮細(xì)胞膜表面的Ra、Peak Count和Rp-v分別為9.554±2.001nm、13.180±4.040 nm、33.895±7.347 nm。2 乳腺增生組上皮細(xì)胞膜表面Ra、Peak Count和Rp-v分別為14.730±3.945 nm、15.647±5.583nm、47.527±14.014 nm。3 乳腺癌組上皮細(xì)胞膜表面Ra、Peak Count

5、和Rp-v分別為23.040±6.727 nm、16.560±6.227nm、78.436±35.841 nm。 統(tǒng)計(jì)分析上述數(shù)據(jù)，比較Ra、Rp-v，三組之間存在顯著性差異(P＜0.01)；比較Peak count，增生組和乳腺癌組之間不存在顯著差異(P＞0.05)。 用AFM軟件測(cè)量分析標(biāo)本細(xì)胞膜表面的蛋白分布情況，從細(xì)胞膜表面的平均Ra、Peak Count和Rp-v的數(shù)據(jù)分析中可以看到，隨著乳腺上皮細(xì)胞從正常到增

6、生癥再到乳腺癌，膜表面的蛋白逐漸增多增大。這與其功能是相對(duì)應(yīng)的，因?yàn)閺恼Ｈ橄俚饺橄僭錾Y再到乳腺癌，細(xì)胞的活躍程度逐漸增加，而活躍程度的增加即可表現(xiàn)在細(xì)胞膜表面蛋白的變化上。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)在世界上首次采用AFM觀(guān)察人活體乳腺上皮細(xì)胞，觀(guān)察到當(dāng)乳腺增生時(shí)，細(xì)胞膜表面的突起增加，突起的形態(tài)一致，突起在細(xì)胞表面排列細(xì)密，有一定的規(guī)則性；而當(dāng)乳腺癌變時(shí)可見(jiàn)乳腺細(xì)胞膜表面的起伏和皺褶增多，突起大小不一，部分突起直徑增大，呈現(xiàn)出融合的趨勢(shì)